የጎመን ዘር ዱቄት እና ውህዶቹ ለአካባቢ ተስማሚ የሆኑ እጭዎችን ለመከላከል እንደ ባዮሎጂካል እንቅስቃሴ

ውጤታማ በሆነ መንገድትንኞችን መቆጣጠርእና የሚሸከሙትን በሽታዎች ቁጥር በመቀነስ፣ ስትራቴጂካዊ፣ ዘላቂ እና ለአካባቢ ተስማሚ የሆኑ የኬሚካል ፀረ-ተባይ መድኃኒቶችን የሚተኩ አማራጮች ያስፈልጋሉ። ከአንዳንድ የብራሲካሴያ (የብራሲካ ቤተሰብ) የዘር ምግቦችን ከባዮሎጂያዊ እንቅስቃሴ-አልባ ግሉኮሲኖሌትስ ኢንዛይማቲክ ሃይድሮሊሲስ የሚመረቱ ከእፅዋት የተገኙ ኢሶቲዮሲያኔትስ ምንጭ አድርገን ገምግመናል (L., 1762)። አምስት ቅባት የሌለው የዘር ምግብ (ብራሲካ ጁንሴአ (L) Czern., 1859, Lepidium sativum L., 1753, Sinapis alba L., 1753, Thlaspi arvense L., 1753 እና Thlaspi arvense - ሶስት ዋና ዋና የሙቀት ማነቃቂያ እና የኢንዛይማቲክ መበላሸት ዓይነቶች። የኬሚካል ምርቶች። የአሊል ኢሶቲዮሲያኔት፣ ቤንዚል ኢሶቲዮሲያኔት እና 4-ሃይድሮክሲቤንዚሊሶቲዮሲያኔት ለኤዴስ አግይፕቲ እጭዎች መርዛማነትን (LC50) ለመወሰን። በ24 ሰዓት ተጋላጭነት = 0.04 ግ/120 ሚሊ ሊትር dH2O)። ለሰናፍጭ፣ ነጭ ሰናፍጭ እና ለፈረስ ጅራት የLC50 እሴቶች። የዘር ዱቄት ከአሊል ኢሶቲዮሲያኔት (LC50 = 19.35 ppm) እና 4 ጋር ሲነጻጸር በቅደም ተከተል 0.05፣ 0.08 እና 0.05 ነበር። -ሃይድሮክሲቤንዚሊሶቲዮሲያኔት (LC50 = 55.41 ppm) ከህክምናው በኋላ በ24 ሰዓታት ውስጥ ለዕጭዎች የበለጠ መርዛማ ሆኗል። እነዚህ ውጤቶች ከአልፋልፋ የዘር ዱቄት ምርት ጋር የሚጣጣሙ ናቸው። የቤንዚል ኤስተር ከፍተኛ ውጤታማነት ከተሰላው የLC50 እሴቶች ጋር ይዛመዳል። የዘር ዱቄትን መጠቀም ውጤታማ የትንኝ መቆጣጠሪያ ዘዴን ሊያቀርብ ይችላል፣ የመስቀል ዘር ዱቄት እና ዋና ዋና የኬሚካል ክፍሎቹ በትንኝ እጭ ላይ ያለውን ውጤታማነት እና በመስቀል ዘር ዱቄት ውስጥ ያሉ ተፈጥሯዊ ውህዶች ለትንኝ ቁጥጥር እንደ ተስፋ ሰጪ እጭ ሆኖ ሊያገለግል ይችላል።
በኤዲስ ትንኞች ምክንያት የሚከሰቱ በቬክተር የሚተላለፉ በሽታዎች በዓለም አቀፍ ደረጃ ትልቅ የጤና ችግር ሆነው ቀጥለዋል። የወባ ትንኝ በሽታዎች መከሰት በጂኦግራፊያዊ መልኩ1፣2፣3 እየተስፋፋ ሲሆን እንደገና ብቅ ይላል፣ ይህም ለከባድ በሽታ ወረርሽኝ4፣5፣6፣7 ያስከትላል። በሰዎችና በእንስሳት መካከል የበሽታዎች ስርጭት (ለምሳሌ፣ ቺኩንጉንያ፣ ዴንጊ፣ የሪፍት ቫሊ ትኩሳት፣ ቢጫ ወባ እና ዚካ ቫይረስ) ታይቶ የማይታወቅ ነው። የዴንጊ ትኩሳት ብቻውን በሐሩር ክልል ውስጥ በግምት 3.6 ቢሊዮን ሰዎችን ለበሽታ የመጋለጥ አደጋ ላይ ይጥላል፣ በየዓመቱ 390 ሚሊዮን ኢንፌክሽኖች ይከሰታሉ፣ ይህም በዓመት ከ6,100-24,300 ሞት ያስከትላል። በደቡብ አሜሪካ የዚካ ቫይረስ እንደገና መታየት እና መከሰት በበሽታው በተያዙ ሴቶች ላይ በሚደርሰው የአንጎል ጉዳት ምክንያት የዓለም አቀፍ ትኩረትን ስቧል2። ክሬመር እና ሌሎች 3 የኤዲስ ትንኞች ጂኦግራፊያዊ ክልል መስፋፋታቸውን እንደሚቀጥሉ እና በ2050 ግማሹ የዓለም ህዝብ በወባ ትንኝ በሚተላለፉ አርቦቫይረሶች የመጠቃት አደጋ ላይ እንደሚወድቅ ይተነብያሉ።
በቅርብ ጊዜ ከተዘጋጁት የዴንጊ እና የቢጫ ትኩሳት ክትባቶች በስተቀር፣ በአብዛኛዎቹ የወባ ትንኝ በሽታዎች ላይ ክትባቶች ገና አልተዘጋጁም9,10,11። ክትባቶች አሁንም በተወሰነ መጠን ይገኛሉ እና በክሊኒካዊ ሙከራዎች ብቻ ጥቅም ላይ ይውላሉ። ሰው ሰራሽ ፀረ-ተባይ መድኃኒቶችን በመጠቀም የወባ ትንኝ ቬክተሮችን መቆጣጠር የወባ ትንኝ በሽታዎችን ስርጭት ለመቆጣጠር ቁልፍ ስትራቴጂ ነው12,13። ሰው ሰራሽ ፀረ-ተባይ ትንኞችን በመግደል ረገድ ውጤታማ ቢሆኑም፣ ሰው ሰራሽ ፀረ-ተባይ መድኃኒቶችን መጠቀም ቀጣይ ኢላማ ያልሆኑ ህዋሳትን አሉታዊ ተጽዕኖ ያሳድራል እና አካባቢውን ያበክላል14,15,16። የበለጠ አስደንጋጭ የሆነው ለኬሚካል ፀረ-ተባይ ትንኞች የመቋቋም አዝማሚያ17,18,19 ነው። ከፀረ-ተባይ መድኃኒቶች ጋር የተያያዙት እነዚህ ችግሮች የበሽታ ቬክተሮችን ለመቆጣጠር ውጤታማ እና ለአካባቢ ተስማሚ የሆኑ አማራጮችን ፍለጋን አፋጥነዋል።
የተለያዩ ተክሎች ለተባይ መቆጣጠሪያ የፊቶፔስቲሳይዶች ምንጭ ሆነው ተዘጋጅተዋል። የእፅዋት ንጥረ ነገሮች በአጠቃላይ ለአካባቢ ተስማሚ ናቸው ምክንያቱም በቀላሉ የሚበላሹ እና እንደ አጥቢ እንስሳት፣ ዓሳ እና አምፊቢያን ላሉ ኢላማ ላልሆኑ ፍጥረታት ዝቅተኛ ወይም ቸልተኛ መርዛማነት ስላላቸው20,22። የእፅዋት ዝግጅቶች የተለያዩ የትንኞችን የህይወት ደረጃዎች በብቃት ለመቆጣጠር የተለያዩ የተግባር ዘዴዎችን በመጠቀም የተለያዩ ባዮአክቲቭ ውህዶችን እንደሚያመርቱ ይታወቃል23,24,25,26። እንደ አስፈላጊ ዘይቶች እና ሌሎች ንቁ የእፅዋት ንጥረ ነገሮች ያሉ ከእፅዋት የተገኙ ውህዶች ትኩረትን አግኝተዋል እና የትንኝ ቬክተሮችን ለመቆጣጠር አዳዲስ መሳሪያዎችን መንገድ ጠርገዋል። አስፈላጊ ዘይቶች፣ ሞኖተርፔኖች እና ሴስኩዊተርፔኖች እንደ ማገጃዎች፣ መከላከያዎችን እና ኦቪሳይዶችን ያገለግላሉ27,28,29,30,31,32,33። ብዙ የአትክልት ዘይቶች የትንኝ እጭ፣ የሙሽራ እጮች እና አዋቂዎች ሞት ያስከትላሉ34,35,36፣ ይህም የነርቭ፣ የመተንፈሻ አካላት፣ የኢንዶክሪን እና ሌሎች አስፈላጊ የነፍሳት ስርዓቶችን ይነካል37።
የቅርብ ጊዜ ጥናቶች የሰናፍጭ ተክሎችን እና ዘሮቻቸውን እንደ ባዮአክቲቭ ውህዶች ምንጭ ስለመጠቀም ግንዛቤ ሰጥተዋል። የሰናፍጭ ዘር ዱቄት እንደ ባዮፉሚጋንት38,39,40,41 ተፈትኖ አረም ለመግታት የአፈር ማሻሻያ ሆኖ አገልግሏል42,43,44 እና የአፈር ወለድ እፅዋት በሽታ አምጪ ተህዋሲያንን ለመቆጣጠር45,46,47,48,49,50፣ የእፅዋት አመጋገብ። ኔማቶዶች 41,51, 52, 53, 54 እና ተባዮች 55, 56, 57, 58, 59, 60። የእነዚህ የዘር ዱቄቶች የፈንገስ ማጥፊያ እንቅስቃሴ ኢሶቲዮሲያኔትስ38,42,60 በሚባሉ የእፅዋት መከላከያ ውህዶች ምክንያት ነው። በእፅዋት ውስጥ እነዚህ የመከላከያ ውህዶች በእፅዋት ሴሎች ውስጥ ባዮአክቲቭ ያልሆኑ ግሉኮሲኖሌትስ መልክ ይቀመጣሉ። ሆኖም ግን፣ ተክሎች በነፍሳት መመገብ ወይም በበሽታ አምጪ ኢንፌክሽን ሲጎዱ፣ ግሉኮሲኖሌትስ በማይሮሲኔዝ ወደ ባዮአክቲቭ ኢሶቲዮሲያኔትስ55,61 ሃይድሮላይዝድ ይደረጋል። ኢሶቲዮሲያኔትስ ሰፊ-ስፔክትረም ፀረ-ተሕዋስያን እና ፀረ-ተባይ ማጥፊያ እንቅስቃሴ እንዳላቸው የሚታወቁ ተለዋዋጭ ውህዶች ሲሆኑ፣ በብራሲካሴዋ ዝርያዎች መካከል አወቃቀራቸው፣ ባዮሎጂያዊ እንቅስቃሴያቸው እና ይዘታቸው በስፋት ይለያያል42,59,62,63.
ምንም እንኳን ከሰናፍጭ ዘር ዱቄት የተገኙት ኢሶቲዮሲያኔቶች የነፍሳት ማጥፊያ እንቅስቃሴ እንዳላቸው ቢታወቅም፣ በሕክምና አስፈላጊ በሆኑ የአርትሮፖድ ቬክተሮች ላይ ስለ ባዮሎጂካል እንቅስቃሴ መረጃ የለም። ጥናታችን በኤዴስ ትንኞች ላይ አራት የተበላሹ የዘር ዱቄቶች የእጭ ማጥፊያ እንቅስቃሴን መርምሯል። የኤዴስ አጌፕቲ እጭ። የጥናቱ ዓላማ ለአካባቢ ተስማሚ የሆኑ ባዮፔስቲሳይዶችን ለትንኝ መቆጣጠሪያ መጠቀምን ለመገምገም ነበር። የዘር ዱቄቱ ሶስት ዋና ዋና የኬሚካል ክፍሎች፣ አሊል ኢሶቲዮሲያኔት (AITC)፣ ቤንዚል ኢሶቲዮሲያኔት (BITC) እና 4-ሃይድሮክሲቤንዚሊሶቲዮሲያኔት (4-HBITC) እነዚህ የኬሚካል ክፍሎች በትንኝ እጭ ላይ ያላቸውን ባዮሎጂያዊ እንቅስቃሴ ለመፈተሽ ተፈትነዋል። ይህ አራት የጎመን ዘር ዱቄቶች እና ዋና ዋና የኬሚካል ክፍሎቹን በትንኝ እጭ ላይ ውጤታማነትን የሚገመግም የመጀመሪያው ሪፖርት ነው።
የኤዲስ አጊፕቲ (የሮክፌለር ዝርያ) የላቦራቶሪ ኮሎኒያሎች በ26°ሴ፣ 70% አንጻራዊ እርጥበት (RH) እና 10፡14 ሰዓት (L:D ፎቶፔሪዮይድ) ተጠብቀዋል። የተጋቡ ሴቶች በፕላስቲክ ጎጆዎች (ቁመት 11 ሴ.ሜ እና ዲያሜትር 9.5 ሴ.ሜ) ውስጥ ተቀምጠው በሲትሬትድ የበሬ ደም (HemoStat Laboratories Inc.፣ Dixon፣ CA፣ USA) በመጠቀም በጠርሙስ መመገቢያ ስርዓት በኩል ይመገባሉ። የደም መመገብ እንደተለመደው የሚከናወነው ከሚዘዋወረው የውሃ መታጠቢያ ቱቦ (HAAKE S7፣ Thermo-Scientific፣ Waltham፣ MA፣ USA) ጋር የተገናኘ የሜምብሬን ባለብዙ ብርጭቆ መጋቢ (Chemglass፣ Life Sciences LLC፣ Vineland፣ NJ፣ USA) በመጠቀም የሙቀት መቆጣጠሪያ 37°ሴ በመጠቀም ነው። የፓራፊልም ኤም ፊልም በእያንዳንዱ የመስታወት መጋቢ ክፍል ግርጌ ላይ ዘርጋ (154 ሚሜ2 አካባቢ)። ከዚያም እያንዳንዱ መጋቢ የተጋቡ ሴቶችን የያዘውን ጎጆ በሚሸፍነው የላይኛው ፍርግርግ ላይ ይደረጋል። በግምት 350–400 μl የከብት ደም በመስታወት መጋቢ ፈንጣጣ ውስጥ የፓስተር ፒፔት (ፊሸርብራንድ፣ ፊሸር ሳይንቲፊክ፣ ዋልተም፣ ኤምኤ፣ ዩኤስኤ) በመጠቀም ተጨምሮ የአዋቂዎች ትሎች ቢያንስ ለአንድ ሰዓት እንዲፈስ ተፈቅዶላቸዋል። ከዚያም እርጉዝ ሴቶች 10% የሱክሮስ መፍትሄ ተሰጥቷቸው እና እንቁላል እንዲጥሉ ተፈቅዶላቸዋል እርጥብ የማጣሪያ ወረቀት በተናጠል እጅግ በጣም ግልጽ በሆነ የሶፍሌ ኩባያዎች (1.25 fl oz መጠን፣ ዳርት ኮንቴይነር ኮርፖሬሽን፣ ሜሰን፣ ኤምአይ፣ ዩኤስኤ) በተሸፈነ ውሃ። እንቁላል የያዘውን የማጣሪያ ወረቀት በታሸገ ከረጢት (SC Johnsons፣ Racine፣ WI) ውስጥ ያስቀምጡ እና በ26°ሴ ያስቀምጡ። እንቁላሎቹ ተፈልፈዋል እና በግምት 200–250 የሚሆኑ እጮች በፕላስቲክ ትሪዎች ውስጥ የጥንቸል ቾው (ZuPreem፣ Premium Natural Products, Inc., Mission, KS, USA) እና የጉበት ዱቄት (MP Biomedicals, LLC, Solon, OH, USA) ድብልቅ እና የዓሳ ፊሌት (TetraMin፣ Tetra GMPH፣ Meer፣ Germany) በ2፡1፡1 ጥምርታ ውስጥ አድገዋል። በባዮሳይስ ጥናቶቻችን ውስጥ የመጨረሻዎቹ የሶስተኛው ኢንስታር እጮች ጥቅም ላይ ውለዋል።
በዚህ ጥናት ውስጥ ጥቅም ላይ የዋለው የእፅዋት ዘር ቁሳቁስ ከሚከተሉት የንግድ እና የመንግስት ምንጮች የተገኘ ነው፡- ብራሲካ ጁንሴ (ቡናማ ሰናፍጭ-ፓስፊክ ወርቅ) እና ብራሲካ ጁንሴ (ነጭ ሰናፍጭ-አይዳ ወርቅ) ከፓስፊክ ሰሜን ምዕራብ የገበሬዎች ህብረት ስራ ማህበር፣ ዋሽንግተን ስቴት፣ ዩኤስኤ፤ (የአትክልት ክሬስ) ከኬሊ ሴድ ኤንድ ሃርድዌር ኩባንያ፣ ፔኦሪያ፣ ኢሊኖይ፣ ዩኤስኤ እና ትላስፒ አርቨንሴ (ፊልድ ፔኒክሬስ-ኤሊሳቤት) ከዩኤስኤዲኤ-አርኤስ፣ ፔኦሪያ፣ ኢሊኖይ፣ ዩኤስኤ፤ በጥናቱ ውስጥ ጥቅም ላይ የዋሉት ዘሮች አንዳቸውም በፀረ-ተባይ አልታከሙም። በዚህ ጥናት ውስጥ ሁሉም የዘር ቁሳቁስ በአካባቢው እና በሀገር አቀፍ ደንቦች እና በሁሉም ተዛማጅ የአካባቢ እና የሀገር አቀፍ ደንቦች መሰረት ተሰርቶ ጥቅም ላይ ውሏል። ይህ ጥናት ትራንስጀኒክ የእፅዋት ዝርያዎችን አልመረመረም።
የብራሲካ ጁንሴ (PG)፣ አልፋልፋ (Ls)፣ ነጭ ሰናፍጭ (IG)፣ የትራስፒ አርቨንሴ (DFP) ዘሮች 0.75 ሚሜ ጥልፍልፍ እና አይዝጌ ብረት ሮተር፣ 12 ጥርሶች፣ 10,000 rpm (ሠንጠረዥ 1) የተገጠመለትን የሬችች ዚኤም200 አልትራሴንትሪፉጋል ወፍጮ (ሬትሽ፣ ሃን፣ ጀርመን) በመጠቀም ወደ ጥሩ ዱቄት ተፈጭተዋል። የተፈጨው የዘር ዱቄት ወደ ወረቀት ቲምብል ተላልፎ በሶክስሌት መሳሪያ ውስጥ ለ24 ሰዓታት በሄክሳን ተወግዷል። የተፈጨ የሜዳ ሰናፍጭ ንዑስ ናሙና ማይሮሲኔዝን ለማፍረስ እና የግሉኮሲኖሌት ሃይድሮሊሲስን ለመከላከል በ100 ዲግሪ ሴልሺየስ ለ1 ሰዓት በሙቀት ታክሟል። በሙቀት የታከመ የፈረስ ጅራት ዘር ዱቄት (DFP-HT) ማይሮሲኔዝን በማፍለቅ እንደ አሉታዊ መቆጣጠሪያ ጥቅም ላይ ውሏል።
ቀደም ሲል በታተመው ፕሮቶኮል 64 መሠረት ከፍተኛ አፈፃፀም ያለው ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ (HPLC) በመጠቀም በሦስት እጥፍ ተመርጧል። በአጭሩ፣ 3 ሚሊ ሊትር ሜታኖል ወደ 250 ሚ.ግ. የተፈጨ የዘር ዱቄት ናሙና ተጨምሯል። እያንዳንዱ ናሙና በውሃ መታጠቢያ ውስጥ ለ30 ደቂቃዎች በሶኒክስ ውስጥ ተጣርቶ በ23°ሴ ለ16 ሰዓታት በጨለማ ውስጥ ይቀራል። ከዚያም 1 ሚሊ ሊትር የኦርጋኒክ ንብርብር ክፍል በ0.45 μm ማጣሪያ በኩል ወደ አውቶሳምፕለር ተጣርቶ ተወስዷል። በሺማድዙ HPLC ሲስተም (ሁለት LC 20AD ፓምፖች፤ SIL 20A አውቶሳምፕለር፤ DGU 20A ዲጋሰር፤ በ237 nm ላይ ለክትትል SPD-20A UV-VIS ማወቂያ፤ እና CBM-20A የመገናኛ አውቶቡስ ሞዱል) ላይ የሚሰራው የዘር ዱቄት የግሉኮሲኖሌት ይዘት በሦስት እጥፍ ተወስኗል። የሺማድዙ LC ሶሉሽን ሶፍትዌር ስሪት 1.25 (ሺማድዙ ኮርፖሬሽን፣ ኮሎምቢያ፣ ኤምዲ፣ ዩኤስኤ) በመጠቀም። አምድ የC18 Inertsil የተገላቢጦሽ ምዕራፍ አምድ (250 ሚሜ × 4.6 ሚሜ፤ RP C-18፣ ODS-3፣ 5u፤ GL Sciences፣ Torrance፣ CA፣ USA) ነበር። የመጀመሪያዎቹ የሞባይል ምዕራፍ ሁኔታዎች በውሃ ውስጥ 12% ሜታኖል/88% 0.01 M ቴትራቡቲላሞኒየም ሃይድሮክሳይድ ተቀምጠዋል (TBAH፤ ሲግማ-አልድሪች፣ ሴንት ሉዊስ፣ MO፣ USA) የፍሰት መጠን 1 ሚሊ ሊትር/ደቂቃ ነበር። 15 μl ናሙና ከተከተቡ በኋላ የመጀመሪያዎቹ ሁኔታዎች ለ20 ደቂቃዎች ተጠብቀው ቆይተዋል፣ ከዚያም የሟሟት ጥምርታ ወደ 100% ሜታኖል ተስተካክሏል፣ አጠቃላይ የናሙና ትንተና ጊዜ 65 ደቂቃዎች ነው። አዲስ የተዘጋጁ የሲናፓይን፣ የግሉኮሲኖሌት እና የማይሮሲን ደረጃዎች (ሲግማ-አልድሪች፣ ሴንት ሉዊስ፣ MO፣ USA) ተከታታይ መሟሟት መደበኛ ኩርባ (nM/mAb ላይ የተመሠረተ) የተፈጠረ ሲሆን ይህም የተበላሸውን የዘር ምግብ ግሉኮሲኖሌትስ የሰልፈር ይዘት ለመገመት ነው። በናሙናዎቹ ውስጥ ያሉት የግሉኮሲኖሌት ክምችቶች በተመሳሳይ አምድ እና ቀደም ሲል በተገለጸው ዘዴ በመጠቀም በOpenLAB CDS ChemStation ስሪት (C.01.07 SR2 [255]) በመጠቀም በAgilent 1100 HPLC (Agilent፣ Santa Clara፣ CA፣ USA) ላይ ተፈትነዋል። የግሉኮሲኖሌት ክምችቶች ተወስነዋል፤ በHPLC ስርዓቶች መካከል ተመሳሳይ መሆን አለባቸው።
አሊል ኢሶቲዮሲያኔት (94%፣ የተረጋጋ) እና ቤንዚል ኢሶቲዮሲያኔት (98%) የተገዙት ከፊሸር ሳይንቲፊክ (ቴርሞ ፊሸር ሳይንቲፊክ፣ ዋልተም፣ ኤምኤ፣ ዩኤስኤ) ነው። 4-ሃይድሮክሲቤንዚሊሶቲዮሲያኔት የተገዛው ከChemCruz (ሳንታ ክሩዝ ባዮቴክኖሎጂ፣ ካሊፎርኒያ፣ ዩኤስኤ) ነው። በማይሮሲናሴ ኢንዛይማቲክ በሆነ መንገድ ሃይድሮላይዝ ሲደረግ፣ ግሉኮሲኖሌትስ፣ ግሉኮሲኖሌትስ እና ግሉኮሲኖሌትስ በቅደም ተከተል አሊል ኢሶቲዮሲያኔት፣ ቤንዚል ኢሶቲዮሲያኔት እና 4-ሃይድሮክሲቤንዚሊሶቲዮሲያኔትን ይፈጥራሉ።
የላቦራቶሪ ባዮሳይሶች የተከናወኑት በሙቱሪ እና ሌሎች 32 ዘዴ መሰረት ሲሆን ማሻሻያዎችን በማድረግ ነው። በጥናቱ ውስጥ አምስት ዝቅተኛ ቅባት ያላቸው የዘር መኖዎች ጥቅም ላይ ውለዋል፡ DFP፣ DFP-HT፣ IG፣ PG እና Ls። 20 እጭዎች 120 ሚሊ ሊትር የተወገደ ውሃ (dH2O) በያዘ 400 ሚሊ ሊትር በሚጣል ባለ ሶስት አቅጣጫ መጠጫ (VWR International, LLC, Radnor, PA, USA) ውስጥ ተቀምጠዋል። ሰባት የዘር ምግብ ክምችት ለትንኝ እጭ መርዛማነት ተፈትኗል፡ 0.01፣ 0.02፣ 0.04፣ 0.06፣ 0.08፣ 0.1 እና 0.12 ግ የዘር ምግብ/120 ሚሊ ሊትር dH2O ለDFP የዘር ምግብ፣ DFP-HT፣ IG እና PG። የመጀመሪያ ደረጃ ባዮሳይሶች እንደሚያሳዩት የተወገደ የLs የዘር ዱቄት ከተሞከሩት አራት ሌሎች የዘር ዱቄቶች የበለጠ መርዛማ ነው። ስለዚህ፣ የኤልኤስ ዘር ምግብን ሰባት የሕክምና ክምችቶችን ወደሚከተሉት ክምችቶች አስተካክለናል፡ 0.015፣ 0.025፣ 0.035፣ 0.045፣ 0.055፣ 0.065 እና 0.075 ግ/120 mL dH2O።
በምርመራ ሁኔታዎች ውስጥ መደበኛ የነፍሳት ሞትን ለመገምገም ያልታከመ የቁጥጥር ቡድን (dH20፣ የዘር ምግብ ተጨማሪ ምግብ የሌለው) ተካቷል። ለእያንዳንዱ የዘር ምግብ መርዛማ ባዮአሳይስ ሶስት የተባዙ የሶስት ቁልቁለት ቢከሮችን (በአንድ ቢከር 20 የመጨረሻ ሶስተኛ ኢንስታር እጭ) በድምሩ 108 ብልቃጦችን ያካትታል። የታከሙ ኮንቴይነሮች በክፍል ሙቀት (20-21°ሴ) ተከማችተው ለህክምና ክምችት በተከታታይ በ24 እና 72 ሰዓታት ውስጥ የእጭ ሞት ተመዝግቧል። የትንኝ አካል እና ተጨማሪዎች በቀጭን አይዝጌ ብረት ስፓቱላ ሲወጉ ወይም ሲነኩ የማይንቀሳቀሱ ከሆነ የትንኝ እጭዎች እንደሞቱ ይቆጠራሉ። የሞቱ እጭዎች ብዙውን ጊዜ በመያዣው ግርጌ ወይም በውሃ ወለል ላይ በጀርባ ወይም በሆርሶ ቦታ ላይ እንቅስቃሴ አልባ ሆነው ይቆያሉ። ሙከራው በተለያዩ ቀናት ውስጥ ሶስት ጊዜ ተደግሟል፣ ይህም ለእያንዳንዱ የሕክምና ክምችት የተጋለጡ 180 እጭዎች ናቸው።
የAITC፣ BITC እና 4-HBITC ለትንኝ እጮች የሚያስከትለው መርዛማነት በተመሳሳይ የባዮአሳይ ሂደት ግን በተለያዩ ህክምናዎች ተገምግሟል። ለእያንዳንዱ ኬሚካል 100 µL ኬሚካሉን ወደ 900 µL ፍጹም ኤታኖል በመጨመር እና ለ30 ሰከንዶች በደንብ ለመደባለቅ በማወዛወዝ 100,000 ppm የአክሲዮን መፍትሄዎችን ያዘጋጁ። የሕክምናው ክምችት የሚወሰነው በቅድመ ባዮአሳዎቻችን ላይ በመመስረት ሲሆን ይህም BITC ከAITC እና 4-HBITC የበለጠ መርዛማ እንደሆነ አረጋግጧል። መርዛማነትን ለመወሰን፣ 5 የBITC ክምችት (1፣ 3፣ 6፣ 9 እና 12 ppm)፣ 7 የAITC ክምችት (5፣ 10፣ 15፣ 20፣ 25፣ 30 እና 35 ppm) እና 6 የ4-HBITC ክምችት (15፣ 15፣ 20፣ 25፣ 30 እና 35 ppm)። 30፣ 45፣ 60፣ 75 እና 90 ppm)። የቁጥጥር ህክምናው 108 μL ፍፁም ኤታኖል በመርፌ ተሰጥቷል፣ ይህም ከኬሚካል ህክምናው ከፍተኛ መጠን ጋር እኩል ነው። ባዮአሳይስ ከላይ እንደተጠቀሰው ተደግሟል፣ በአንድ የህክምና ክምችት በአጠቃላይ 180 እጭዎችን አጋልጧል። ለ24 ሰዓታት ያለማቋረጥ ከተጋለጡ በኋላ ለእያንዳንዱ የAITC፣ BITC እና 4-HBITC ክምችት የእጭ ሞት ተመዝግቧል።
የ65 መጠን-ተያያዥ የሞት መረጃ ፕሮቢት ትንተና የተከናወነው በፖሎ ሶፍትዌር (ፖሎ ፕላስ፣ ሌኦራ ሶፍትዌር፣ ስሪት 1.0) በመጠቀም ሲሆን ይህም 50% ገዳይ ክምችት (LC50)፣ 90% ገዳይ ክምችት (LC90)፣ ተዳፋት፣ ገዳይ መጠን ኮፊሸንት እና 95% ገዳይ ክምችትን ለማስላት ነው። ይህም በሎግ-የተለወጡ ክምችት እና የመጠን-ሞት ኩርባዎች ላይ ለሚከሰቱ ገዳይ መጠን ጥምርታዎች በራስ መተማመን ክፍተቶች ላይ የተመሰረተ ነው። የሞት መረጃው የተመሰረተው ለእያንዳንዱ የሕክምና ክምችት በተጋለጡ 180 እጭዎች ላይ በተጣመረ የተባዛ መረጃ ላይ ነው። ለእያንዳንዱ የዘር ምግብ እና ለእያንዳንዱ የኬሚካል ክፍል ፕሮባቢሊቲ ትንተናዎች ለብቻው ተካሂደዋል። በገዳይ መጠን ጥምርታ 95% በራስ መተማመን ክፍተት ላይ በመመስረት፣ የዘር ምግብ እና የኬሚካል ንጥረ ነገሮች ለትንኝ እጭዎች ያላቸው መርዛማነት በእጅጉ የተለየ እንደሆነ ተቆጥሯል፣ ስለዚህ 1 እሴት ያለው የመተማመን ክፍተት በከፍተኛ ሁኔታ የተለየ አልነበረም፣ P = 0.0566።
የHPLC ውጤቶች በዲኤፍፒ፣ አይጂ፣ ፒጂ እና ኤልኤስ ውስጥ ዋና ዋና የግሉኮሲኖሌትስን ለመወሰን በሰንጠረዥ 1 ውስጥ ተዘርዝረዋል። በተፈተኑት የዘር ዱቄቶች ውስጥ ዋና ዋና የግሉኮሲኖሌትስ ዓይነቶች ከዲኤፍፒ እና ፒጂ በስተቀር የተለያዩ ሲሆኑ ሁለቱም ማይሮሲኔዝ ግሉኮሲኖሌትስን ይይዛሉ። በPG ውስጥ ያለው የማይሮሲኒን ይዘት ከዲኤፍፒ ጋር ሲነጻጸር በቅደም ተከተል 33.3 ± 1.5 እና 26.5 ± 0.9 mg/g ከፍ ያለ ነበር። የኤልኤስ የዘር ዱቄት 36.6 ± 1.2 mg/g ግሉኮግሊኮን፣ የአይጂ የዘር ዱቄት ደግሞ 38.0 ± 0.5 mg/g ሲናፓይን ይዟል።
የAe እጭዎች። የAedes aegypti ትንኞች በተበላሸ የዘር ምግብ ሲታከሙ ተገድለዋል፣ ምንም እንኳን የሕክምናው ውጤታማነት እንደ ተክሎች ዝርያ ይለያያል። DFP-NT ብቻ ለትንኝ እጭዎች ከ24 እና 72 ሰዓታት በኋላ መርዛማ አልነበረም (ሠንጠረዥ 2)። የንቁ የዘር ዱቄት መርዛማነት እየጨመረ በመጣ ቁጥር ጨምሯል (ምስል 1A፣ B)። የዘር ምግብ ለትንኝ እጭዎች የሚያስከትለው መርዛማነት በ24 ሰዓት እና 72 ሰዓት ግምገማዎች ላይ ባለው የLC50 እሴቶች ገዳይ መጠን ጥምርታ 95% CI ላይ በመመስረት በእጅጉ ተቀይሯል (ሠንጠረዥ 3)። ከ24 ሰዓታት በኋላ የLs የዘር ምግብ መርዛማ ውጤት ከሌሎች የዘር ምግብ ሕክምናዎች የበለጠ ነበር፣ ከፍተኛው እንቅስቃሴ እና ለእጭዎች ከፍተኛ መርዛማነት (LC50 = 0.04 ግ/120 ሚሊ ሊትር dH2O)። እጭዎቹ ከ IG፣ Ls እና PG የዘር ዱቄት ሕክምናዎች ጋር ሲነፃፀሩ በ24 ሰዓታት ውስጥ ለ DFP ብዙም ስሜታዊ አልነበሩም፣ በቅደም ተከተል 0.115፣ 0.04 እና 0.08 ግ/120 ሚሊ ሊትር dH2O የLC50 እሴቶች በቅደም ተከተል፣ ከ LC50 እሴት በስታቲስቲክስ ከፍ ያሉ ነበሩ። 0.211 ግ/120 ሚሊ ሊትር dH2O (ሠንጠረዥ 3)። የ DFP፣ IG፣ PG እና Ls የLC90 እሴቶች በቅደም ተከተል 0.376፣ 0.275፣ 0.137 እና 0.074 ግ/120 ሚሊ ሊትር dH2O ነበሩ (ሠንጠረዥ 2)። ከፍተኛው የ DPP ክምችት 0.12 ግ/120 ሚሊ ሊትር dH2O ነበር። ከ24 ሰዓታት ግምገማ በኋላ፣ አማካይ የእጭ ሞት 12% ብቻ ነበር፣ የ IG እና PG እጭዎች አማካይ ሞት በቅደም ተከተል 51% እና 82% ደርሷል። ከ24 ሰዓታት ግምገማ በኋላ፣ ከፍተኛው የኤል ዘር የምግብ ህክምና ክምችት (0.075 ግ/120 ሚሊ ሊትር dH2O) አማካይ የእጭ ሞት 99% ነበር (ምስል 1A)።
የሞት ኩርባዎች የተገመቱት ከኤኢ የግብፅ እጭ (3ኛ ኢንስታር እጭ) መጠን ምላሽ (ፕሮቢት) እስከ ህክምናው ከተደረገ በኋላ ባሉት 24 ሰዓታት (A) እና 72 ሰዓታት (B) ድረስ የዘር ምግብ ክምችት ነው። የነጥብ መስመሩ የዘር ምግብ ሕክምናውን LC50 ይወክላል። DFP Thlaspi arvense፣ DFP-HT Heat inactivated Thlaspi arvense፣ IG Sinapsis alba (Ida Gold)፣ PG Brassica juncea (Pacific Gold)፣ Ls Lepidium sativum።
በ72 ሰዓት ግምገማ፣ የDFP፣ IG እና PG የዘር ዱቄት የLC50 እሴቶች በቅደም ተከተል 0.111፣ 0.085 እና 0.051 ግ/120 ሚሊ ሊትር dH2O ነበሩ። ለLs የዘር ምግብ የተጋለጡ ሁሉም ማለት ይቻላል እጭዎች ከ72 ሰዓታት በኋላ ከተጋለጡ በኋላ ሞተዋል፣ ስለዚህ የሟችነት መረጃ ከProbit ትንተና ጋር የማይጣጣም ነበር። ከሌሎች የዘር ምግቦች ጋር ሲነጻጸር፣ እጭዎቹ ለDFP የዘር ምግብ ሕክምና ብዙም ስሜታዊ አልነበሩም እና በስታቲስቲክስ ከፍ ያለ የLC50 እሴቶች ነበሯቸው (ሰንጠረዥ 2 እና 3)። ከ72 ሰዓታት በኋላ፣ ለDFP፣ IG እና PG የዘር ምግብ ሕክምናዎች የLC50 እሴቶች በቅደም ተከተል 0.111፣ 0.085 እና 0.05 ግ/120 ሚሊ ሊትር dH2O እንደሆኑ ተገምቷል። ከ72 ሰዓታት ግምገማ በኋላ፣ የDFP፣ IG እና PG የዘር ዱቄት የLC90 እሴቶች በቅደም ተከተል 0.215፣ 0.254 እና 0.138 ግ/120 ሚሊ ሊትር dH2O ነበሩ። ከ72 ሰዓታት ግምገማ በኋላ፣ ከፍተኛው 0.12 ግራም/120 ሚሊ ሊትር dH2O መጠን ባለው የDFP፣ የIG እና የPG የዘር ምግብ ሕክምናዎች አማካይ የእጭ ሞት በቅደም ተከተል 58%፣ 66% እና 96% ነበር (ምስል 1ለ)። ከ72 ሰዓት ግምገማ በኋላ፣ የPG የዘር ምግብ ከIG እና ከDFP የዘር ምግብ የበለጠ መርዛማ ሆኖ ተገኝቷል።
ሰው ሰራሽ አይዞቲዮሲያኔት፣ አሊል ኢሶቲዮሲያኔት (AITC)፣ ቤንዚል ኢሶቲዮሲያኔት (BITC) እና 4-ሃይድሮክሲቤንዚሊሶቲዮሲያኔት (4-HBITC) የትንኝ እጭዎችን ውጤታማ በሆነ መንገድ ሊገድሉ ይችላሉ። ከህክምናው በኋላ በ24 ሰዓታት ውስጥ፣ BITC ለእጭዎች የበለጠ መርዛማ ሆኗል፤ 5.29 ppm የLC50 እሴት ለ AITC እና 19.35 ppm ለ 4-HBITC (ሠንጠረዥ 4) ጋር ሲነጻጸር 55.41 ppm የ LC50 እሴት ለእጭዎች የበለጠ መርዛማ ሆኗል። ከ AITC እና BITC ጋር ሲነጻጸር፣ 4-HBITC ዝቅተኛ መርዛማነት እና ከፍተኛ የ LC50 እሴት አለው። በጣም ኃይለኛ በሆነው የዘር ምግብ ውስጥ በሁለቱ ዋና ዋና ኢሶቲዮሲያኔት (Ls እና PG) የትንኝ እጭ መርዛማነት ላይ ጉልህ ልዩነቶች አሉ። በAITC፣ BITC እና 4-HBITC መካከል ባለው የLC50 እሴቶች ገዳይ መጠን ጥምርታ ላይ የተመሠረተ መርዛማነት የስታቲስቲክስ ልዩነት አሳይቷል፣ በዚህም ምክንያት የLC50 ገዳይ መጠን ጥምርታ 95% CI 1 እሴትን አላካተተም (P = 0.05፣ ሠንጠረዥ 4)። የBITC እና AITC ከፍተኛው ክምችት ከተሞከሩት እጮች ውስጥ 100% የሚሆኑትን እንደሚገድል ተገምቷል (ምስል 2)።
የሞት ኩርባዎች የተገመቱት ከAe የመጠን ምላሽ (Probit) ነው። ከህክምናው ከ24 ሰዓታት በኋላ የግብፅ እጭዎች (3ኛ ደረጃ ላይ ያሉ እጭዎች) ሰው ሰራሽ የኢሶቲዮሲያኔት ክምችት ላይ ደርሰዋል። የነጥብ መስመሩ ለኢሶቲዮሲያኔት ሕክምና LC50ን ይወክላል። ቤንዚል ኢሶቲዮሲያኔት BITC፣ አሊል ኢሶቲዮሲያኔት AITC እና 4-HBITC።
የእፅዋት ባዮፀረ-ተባይ መድኃኒቶችን እንደ ትንኝ ቬክተር መቆጣጠሪያ ወኪሎች መጠቀም ለረጅም ጊዜ ጥናት ተደርጎበታል። ብዙ ተክሎች የነፍሳት ማጥፊያ እንቅስቃሴ ያላቸውን ተፈጥሯዊ ኬሚካሎች ያመርታሉ37። ባዮአክቲቭ ውህዶቻቸው ትንኞችን ጨምሮ ተባዮችን በመቆጣጠር ረገድ ትልቅ አቅም ላላቸው ሰው ሰራሽ ፀረ-ተባይ መድኃኒቶች ማራኪ አማራጭ ይሰጣሉ።
የሰናፍጭ ተክሎች ለዘሮቻቸው እንደ ሰብል ይበቅላሉ፣ እንደ ቅመም እና የዘይት ምንጭ ሆነው ያገለግላሉ። የሰናፍጭ ዘይት ከዘሮቹ ሲወጣ ወይም ሰናፍጭ እንደ ባዮፊውል ጥቅም ላይ ሲውል፣ 69 ተረፈ ምርቱ የተበላሸ የዘር ዱቄት ነው። ይህ የዘር ምግብ ብዙዎቹን ተፈጥሯዊ ባዮኬሚካላዊ ክፍሎቹን እና ሃይድሮላይቲክ ኢንዛይሞችን ይይዛል። የዚህ የዘር ምግብ መርዛማነት የሚመነጨው በኢሶቲዮሲያኔትስ ምርት ምክንያት ነው። ኢሶቲዮሲያኔት የሚፈጠረው በዘር ምግብ እርጥበት ወቅት በኢንዛይም ማይሮሲናዝ ማይሮሲናዝ ሃይድሮሊሲስ ሲሆን ፈንገስ፣ ባክቴሪያ ገዳይ፣ ኔማቲሲድ እና ፀረ-ተባይ ተፅእኖዎች እንዲሁም የኬሚካል የስሜት ህዋሳት ተፅእኖዎችን እና የኬሞቴራፒ ባህሪያትን ጨምሮ ሌሎች ባህሪያት እንዳላቸው ይታወቃል61,62,70። በርካታ ጥናቶች እንደሚያሳዩት የሰናፍጭ ተክሎች እና የዘር ምግብ በአፈር እና በተከማቹ የምግብ ተባዮች ላይ እንደ ማጽጃ ውጤታማ በሆነ መንገድ ይሰራሉ57,59,71,72። በዚህ ጥናት፣ የአራት ዘር ምግብ እና የሶስቱ ባዮአክቲቭ ምርቶቹ AITC፣ BITC እና 4-HBITC ወደ ኤዴስ የትንኝ እጭ መርዝ መርምረናል። ኤዴስ ኤግይፕቲ። የዘር ዱቄትን በቀጥታ ወደ ትንኝ እጭ ውስጥ መጨመር ለትንኝ እጭ መርዛማ የሆኑ ኢሶቲዮሲያኔት የሚያመነጩ የኢንዛይም ሂደቶችን እንደሚያነቃቃ ይጠበቃል። ይህ ባዮትራንስፎርሜሽን በከፊል የታየው በዘር ምግብ ውስጥ በሚታየው የእጭ እንቅስቃሴ እና ከመጠቀምዎ በፊት ድዋርድ የሰናፍጭ ዘር ምግብ በሙቀት ሲታከም የነፍሳት ማጥፊያ እንቅስቃሴ ማጣት ነው። የሙቀት ሕክምና ግሉኮሲኖሌትን የሚያነቃቁ ሃይድሮሊቲክ ኢንዛይሞችን እንደሚያጠፋ ይጠበቃል፣ በዚህም ባዮአክቲቭ ኢሶቲዮሲያኔት እንዳይፈጠር ይከላከላል። ይህ የጎመን ዘር ዱቄት በውሃ አካባቢ ውስጥ ትንኞች ላይ የነፍሳት ማጥፊያ ባህሪያትን የሚያረጋግጥ የመጀመሪያው ጥናት ነው።
ከተፈተሹት የዘር ዱቄቶች መካከል የውሃ ክሬስ ዘር ዱቄት (Ls) በጣም መርዛማ ሲሆን የኤዴስ አልቦፒክተስ ሞትን አስከትሏል። የኤዴስ አጊፕቲ እጮች ለ24 ሰዓታት ያለማቋረጥ ይመረታሉ። የቀሩት ሶስት የዘር ዱቄቶች (PG፣ IG እና DFP) ቀርፋፋ እንቅስቃሴ ነበራቸው እና ለ72 ሰዓታት ተከታታይ ህክምና ከተደረገ በኋላ ከፍተኛ ሞት አስከትለዋል። የኤልኤስ የዘር ምግብ ብቻ ከፍተኛ መጠን ያለው ግሉኮሲኖሌት ይዟል፣ PG እና DFP ደግሞ ማይሮሲኔዝ ይይዛሉ እና IG እንደ ዋና ግሉኮሲኖሌት ግሉኮሲኖሌት ይይዛሉ (ሠንጠረዥ 1)። ግሉኮትሮፓኦሊን ወደ BITC ሃይድሮላይዝድ ይደረጋል እና ሲናልቢን ወደ 4-HBITC61,62 ሃይድሮላይዝድ ይደረጋል። የባዮአሳያችን ውጤቶች እንደሚያሳዩት ሁለቱም የኤልኤስ የዘር ምግብ እና ሰው ሰራሽ BITC ለትንኝ እጭዎች በጣም መርዛማ ናቸው። የPG እና የDFP የዘር ምግብ ዋና አካል ማይሮሲኔዝ ግሉኮሲኖሌት ሲሆን ይህም ወደ AITC ሃይድሮላይዝድ ይደረጋል። AITC የትንኝ እጭዎችን በLC50 እሴት በመግደል ውጤታማ ነው። ከAITC እና BITC ጋር ሲነጻጸር፣ 4-HBITC ኢሶቲዮሲያኔት ለእጭዎች በጣም መርዛማ አይደለም። AITC ከBITC ያነሰ መርዛማ ቢሆንም፣ የLC50 እሴቶቻቸው በትንኝ እጭ ላይ ከተሞከሩት ብዙ አስፈላጊ ዘይቶች ያነሱ ናቸው።32,73,74,75።
የኛ የክሩሴፈረስ ዘር ዱቄት አንድ ዋና ግሉኮሲኖሌት ይዟል፣ ይህም በHPLC እንደተወሰነው ከጠቅላላው ግሉኮሲኖሌትስ ከ98-99% በላይ ይይዛል። የሌሎች ግሉኮሲኖሌትስ ዱካዎች ተገኝተዋል፣ ነገር ግን መጠናቸው ከጠቅላላው ግሉኮሲኖሌትስ ከ0.3% ያነሰ ነበር። የውሃ ክሬስ (L. sativum) የዘር ዱቄት ሁለተኛ ግሉኮሲኖሌትስ (sinigrin) ይይዛል፣ ነገር ግን የእነሱ መጠን ከጠቅላላው ግሉኮሲኖሌትስ 1% ነው፣ እና ይዘታቸው አሁንም አነስተኛ ነው (ወደ 0.4 mg/g የዘር ዱቄት)። PG እና DFP ተመሳሳይ ዋና ግሉኮሲኖሌት (ማይሮሲን) ቢይዙም፣ የዘር ምግባቸው የእንቁራሪት እንቅስቃሴ በLC50 እሴቶቻቸው ምክንያት በእጅጉ ይለያያል። በዱቄት ሻጋታ መርዛማነት ይለያያል። የኤዴስ አጊፕቲ እጮች ብቅ ማለት በማይሮሲኔዝ እንቅስቃሴ ልዩነት ወይም በሁለቱ የዘር ምግቦች መካከል ባለው መረጋጋት ምክንያት ሊሆን ይችላል። የማይሮሲኔዝ እንቅስቃሴ እንደ ኢሶቲዮሲያኔትስ ባሉ የብራሲካሴ እፅዋት ውስጥ ባሉ የሃይድሮሊሲስ ምርቶች ባዮአቫሊቲ ውስጥ ትልቅ ሚና ይጫወታል76። ቀደም ሲል በፖኮክ እና ሌሎች 77 እና ዊልኪንሰን እና ሌሎች 78 የተደረጉ ሪፖርቶች በማይሮሲኔዝ እንቅስቃሴ እና መረጋጋት ላይ የሚደረጉ ለውጦች ከጄኔቲክ እና ከአካባቢያዊ ሁኔታዎች ጋር ሊዛመዱ እንደሚችሉ አሳይተዋል።
የሚጠበቀው ባዮአክቲቭ ኢሶቲዮሲያኔት ይዘት የተሰላው ከእያንዳንዱ የዘር ምግብ በ24 እና 72 ሰዓታት (ሠንጠረዥ 5) ላይ ባለው የLC50 እሴቶች ላይ ተመስርቶ ሲሆን ይህም ከተዛማጅ ኬሚካላዊ አተገባበር ጋር ሲነጻጸር ነው። ከ24 ሰዓታት በኋላ በዘር ምግቡ ውስጥ ያሉት ኢሶቲዮሲያኔት ከንጹህ ውህዶች የበለጠ መርዛማ ነበሩ። በሚሊዮን (ppm) የኢሶቲዮሲያኔት ዘር ሕክምናዎች ላይ ተመስርተው የተሰላው የLC50 እሴቶች ለBITC፣ AITC እና 4-HBITC አተገባበር ከLC50 እሴቶች ያነሰ ነበር። እጭ የዘር ምግቡን እንክብሎች ሲበሉ ተመልክተናል (ምስል 3A)። በዚህም ምክንያት እጭ የዘር ምግቡን እንክብሎች በመዋጥ ለመርዛማ ኢሶቲዮሲያኔት የበለጠ የተጠናከረ ተጋላጭነት ሊያገኝ ይችላል። ይህ በ24 ሰዓት ተጋላጭነት በIG እና PG የዘር ምግቡ ሕክምናዎች ላይ በጣም ግልፅ ነበር፣ የLC50 ክምችት ከንጹህ AITC እና 4-HBITC ሕክምናዎች በቅደም ተከተል 75% እና 72% ያነሰ ነበር። የኤልኤስ እና የዲኤፍፒ ሕክምናዎች ከንፁህ ኢሶቲዮሲያኔት የበለጠ መርዛማ ነበሩ፣ የLC50 እሴቶች በቅደም ተከተል 24% እና 41% ዝቅ ብለዋል። በቁጥጥር ህክምናው ውስጥ ያሉ እጭዎች በተሳካ ሁኔታ ተወልደዋል (ምስል 3ለ)፣ በዘር ምግብ ህክምና ውስጥ ያሉት አብዛኛዎቹ እጭዎች አልተወለዱም እና የእጭ እድገት በከፍተኛ ሁኔታ ዘግይቷል (ምስል 3ለ፣መ)። በስፖዶፕቴራሊቱራ ውስጥ፣ ኢሶቲዮሲያኔት ከእድገት መዘግየት እና ከእድገት መዘግየት ጋር የተቆራኙ ናቸው79።
የኤኢ እጭዎች። ኤዴስ ኤግይፕቲ ትንኞች ለ24-72 ሰዓታት ያለማቋረጥ ለብራሲካ የዘር ዱቄት ተጋልጠዋል። (ሀ) የሞቱ እጭዎች በአፍ ውስጥ የዘር ዱቄት ቅንጣቶች (ክብ ቅርጽ ያላቸው)፤ (ለ) የቁጥጥር ሕክምና (ያለ ተጨማሪ የዘር ዱቄት dH20) እጭዎቹ በተለምዶ እንደሚያድጉ እና ከ72 ሰዓታት በኋላ ማደግ እንደሚጀምሩ ያሳያል (C፣ D) እጭዎች በዘር ዱቄት የታከሙ፤ የዘሩ ምግብ በእድገት ላይ ልዩነቶችን አሳይቷል እና አላዳበሩም።
የኢሶቲዮሲያኔት መርዛማ ውጤቶች በትንኝ እጭ ላይ ያለውን ዘዴ አላጠናንም። ሆኖም፣ ቀደም ሲል በቀይ የእሳት ጉንዳኖች (ሶሌኖፕሲስ ኢንቪክታ) ላይ የተደረጉ ጥናቶች እንደሚያሳዩት የግሉታቲዮን ኤስ-ትራንስፌሬዝ (GST) እና ኢስተርሴስ (EST) መከልከል የኢሶቲዮሲያኔት ባዮአክቲቪቲ ዋና ዘዴ ነው፣ እና AITC፣ በዝቅተኛ እንቅስቃሴም ቢሆን፣ ዝቅተኛ ክምችት ውስጥ የሚገኙ ቀይ ከውጭ የሚመጡ የእሳት ጉንዳኖችን የጂኤስቲ እንቅስቃሴን ሊገታ ይችላል። መጠኑ 0.5 µg/ml80 ነው። በተቃራኒው፣ AITC በአዋቂዎች የበቆሎ እጭ ውስጥ አሲቲልኮሊንስቴሬዝ ይከላከላል (ሲቶፊለስ ዜማይስ)81። በትንኝ እጭ ውስጥ የኢሶቲዮሲያኔት እንቅስቃሴ ዘዴን ለማብራራት ተመሳሳይ ጥናቶች መከናወን አለባቸው።
በሙቀት የተገደበ የDFP ሕክምናን በመጠቀም የእፅዋት ግሉኮሲኖሌትስ ምላሽ ሰጪ ኢሶቲዮሲያኔትስን ለመፍጠር የሚፈጠረውን የትንኝ እጭ መቆጣጠሪያ ዘዴ ለመደገፍ እንጠቀማለን። የDFP-HT የዘር ምግብ በተፈተነው የአጠቃቀም መጠን መርዛማ አልነበረም። ላፋርጋ እና ሌሎች 82 ግሉኮሲኖሌትስ በከፍተኛ ሙቀት ለመበስበስ ተጋላጭ እንደሆኑ ሪፖርት አድርገዋል። የሙቀት ሕክምናም በዘር ምግብ ውስጥ ያለውን የማይሮሲኔዝ ኢንዛይም እንደሚያስወግድ እና የግሉኮሲኖሌትስ ምላሽ ሰጪ ኢሶቲዮሲያኔት እንዳይፈጠር ይከላከላል ተብሎ ይጠበቃል። ይህ በኦኩናዴ እና ሌሎች 75 ማይሮሲኔዝ የሙቀት መጠን ስሜታዊ መሆኑን አሳይተዋል፣ ይህም የሰናፍጭ፣ የጥቁር ሰናፍጭ እና የደም ሥር ዘሮች ከ80° በላይ ለሆኑ የሙቀት መጠኖች ሲጋለጡ የማይሮሲኔዝ እንቅስቃሴ ሙሉ በሙሉ እንደተገታ ያሳያል። ሐ. እነዚህ ዘዴዎች በሙቀት የታከመው የዲኤፍፒ የዘር ምግብ የነፍሳት ማጥፊያ እንቅስቃሴን ሊያጡ ይችላሉ።
ስለዚህ የሰናፍጭ ዘር ዱቄት እና ሦስቱ ዋና ዋና ኢሶቲዮሲያኔቶች ለትንኝ እጭ መርዛማ ናቸው። በዘር ዱቄት እና በኬሚካል ሕክምናዎች መካከል ያሉትን ልዩነቶች ከግምት ውስጥ በማስገባት የዘር ዱቄት መጠቀም ውጤታማ የትንኝ መቆጣጠሪያ ዘዴ ሊሆን ይችላል። የዘር ዱቄት አጠቃቀምን ውጤታማነት እና መረጋጋት ለማሻሻል ተስማሚ ቀመሮችን እና ውጤታማ የማድረሻ ስርዓቶችን መለየት ያስፈልጋል። ውጤቶቻችን የሰናፍጭ ዘር ዱቄትን እንደ ሰው ሠራሽ ፀረ-ተባይ መድኃኒት አማራጭ መጠቀም እንደሚቻል ያመለክታሉ። ይህ ቴክኖሎጂ የትንኝ ቬክተሮችን ለመቆጣጠር ፈጠራ መሳሪያ ሊሆን ይችላል። የትንኝ እጭዎች በውሃ አካባቢዎች ስለሚበቅሉ እና የዘር ምግብ ግሉኮሲኖሌትስ በውሃ ሲረጭ ወደ ንቁ ኢሶቲዮሲያኔት ስለሚቀየሩ፣ በትንኝ በተበከለ ውሃ ውስጥ የሰናፍጭ ዘር ዱቄትን መጠቀም ከፍተኛ የቁጥጥር አቅም ይሰጣል። የኢሶቲዮሲያኔትስ የእጭ እንቅስቃሴ ቢለያይም (BITC > AITC > 4-HBITC)፣ የዘር ምግብን ከብዙ ግሉኮሲኖሌትስ ጋር ማዋሃድ መርዛማነትን በአንድ ላይ እንደሚጨምር ለመወሰን ተጨማሪ ምርምር ያስፈልጋል። ይህ የተወገደ የመስቀል ዘር ምግብ እና ሶስት ባዮአክቲቭ ኢሶቲዮሲያኔትስ በትንኞች ላይ የነፍሳት ማጥፊያ ውጤቶችን የሚያሳይ የመጀመሪያው ጥናት ነው። የዚህ ጥናት ውጤቶች ከዘሮቹ የዘይት ማውጣት ውጤት የሆነው የተወገደ የጎመን ዘር ዱቄት ለትንኝ መቆጣጠሪያ እንደ ተስፋ ሰጪ የእጭ ማጥፊያ ወኪል ሆኖ ሊያገለግል እንደሚችል በማሳየት አዲስ መሠረት ጥሏል። ይህ መረጃ የእፅዋት ባዮኮንትሮል ወኪሎችን እና እድገታቸውን እንደ ርካሽ፣ ተግባራዊ እና ለአካባቢ ተስማሚ የሆኑ ባዮፀረ-ተባይ መድኃኒቶች ለማግኘት ይረዳል።
ለዚህ ጥናት የተፈጠሩት የውሂብ ስብስቦች እና የተገኙት ትንታኔዎች በተመጣጣኝ ጥያቄ ከተጓዳኙ ደራሲ ማግኘት ይችላሉ። በጥናቱ መጨረሻ ላይ በጥናቱ ውስጥ ጥቅም ላይ የዋሉ ሁሉም ቁሳቁሶች (ነፍሳት እና የዘር ዱቄት) ወድመዋል።