ለአነስተኛ የውሃ ውስጥ እንጨቶች የንግድ ሳይፐርሜትሪን ዝግጅቶች ሞት እና መርዛማነት

ይህ ጥናት የንግድ ድርጅቶችን ገዳይነት፣ ከፊል ሞት እና መርዛማነት ገምግሟል።ሳይፐርሜትሪንለአኑራን ታድፖሎች የተዘጋጁ ፎርሙላዎች። በአጣዳፊ ምርመራው፣ ከ100-800 μg/L የሆኑ ክምችቶች ለ96 ሰዓታት ተፈትነዋል። በከባድ ምርመራው፣ በተፈጥሮ የሚከሰቱ የሳይፐርሜትሪን ክምችቶች (1፣ 3፣ 6 እና 20 μg/L) ለሞት ተፈትነዋል፣ ከዚያም የማይክሮኑክሊየስ ምርመራ እና ለ7 ቀናት የቀይ የደም ሴል ኒውክሊየር እክሎች ተፈትነዋል። ለታድፖሎች የንግድ ሳይፐርሜትሪን ፎርሙላ LC50 273.41 μg L−1 ነበር። በከባድ ምርመራው፣ ከፍተኛው ክምችት (20 μg L−1) ከ50% በላይ ሞት አስከትሏል፣ ምክንያቱም የተፈተኑትን ታድፖሎች ግማሾቹን ገድሏል። የማይክሮኑክሊየስ ምርመራ በ6 እና 20 μg L−1 ላይ ጉልህ ውጤቶችን አሳይቷል እና በርካታ የኑክሌር እክሎች ተገኝተዋል፣ ይህም የንግድ ሳይፐርሜትሪን ፎርሙላ በፒ. ግራሲሊስ ላይ የጂኖቶክሲክ አቅም እንዳለው ያሳያል። ሳይፐርሜትሪን ለዚህ ዝርያ ከፍተኛ አደጋ ያለው ሲሆን ይህም በአጭርም ሆነ በረጅም ጊዜ ውስጥ በርካታ ችግሮችን ሊያስከትል እና የዚህን ሥነ-ምህዳር ተለዋዋጭነት ሊጎዳ እንደሚችል ያሳያል። ስለዚህ የንግድ ሳይፐርሜትሪን ቀመሮች በፒ. ግራሲሊስ ላይ መርዛማ ተፅእኖ እንዳላቸው መደምደም ይቻላል።
የግብርና እንቅስቃሴዎች ቀጣይነት ባለው መልኩ እየተስፋፉ እና በስፋት እየተተገበሩ በመሆናቸውየተባይ መቆጣጠሪያመለኪያዎች፣ የውሃ ውስጥ እንስሳት በተደጋጋሚ ለፀረ-ተባይ ይጋለጣሉ1,2. በግብርና እርሻዎች አቅራቢያ የውሃ ሀብቶች መበከል እንደ አምፊቢያን ያሉ ኢላማ ያልሆኑ ህዋሳትን እድገት እና ህልውና ሊጎዳ ይችላል።
አምፊቢያኖች በአካባቢ ማትሪክስ ግምገማ ውስጥ በጣም አስፈላጊ እየሆኑ መጥተዋል። አኑራኖች እንደ ውስብስብ የህይወት ዑደቶች፣ ፈጣን የእጭ እድገት መጠኖች፣ የትሮፊክ ሁኔታ፣ የሚተላለፍ ቆዳ10,11፣ ለመራባት በውሃ ላይ ጥገኛ መሆን12 እና ያልተጠበቁ እንቁላሎች11,13,14 ባሉ ልዩ ባህሪያቸው ምክንያት የአካባቢ ብክለትን የሚከላከሉ ጥሩ ባዮኢንዲክተሮች ተደርገው ይወሰዳሉ11,13,14። በተለምዶ የሚያለቅስ እንቁራሪት በመባል የሚታወቀው ትንሹ የውሃ እንቁራሪት (ፊሳላእመስ ግራሲሊስ) የተባይ ብክለት ባዮኢንዲክተር ዝርያ እንደሆነ ታይቷል4,5,6,7,15። ዝርያው በአርጀንቲና፣ በኡራጓይ፣ በፓራጓይ እና በብራዚል 1617 በተለዋዋጭ መኖሪያ ባላቸው ቋሚ ውሃዎች፣ በተጠበቁ አካባቢዎች ወይም አካባቢዎች ውስጥ የሚገኝ ሲሆን በIUCN ምደባ ምክንያት የተረጋጋ እንደሆነ ይቆጠራል18 የተለያዩ መኖሪያዎችን በስፋት በመሰራጨቱ እና በመታገሱ።
ለሳይፐርሜትሪን ከተጋለጡ በኋላ በአምፊቢያን ውስጥ ከፊል ገዳይ ውጤቶች ሪፖርት ተደርገዋል፤ ከእነዚህም መካከል በታድፖሎች ላይ የባህሪ፣ የሞርፎሎጂ እና ባዮኬሚካላዊ ለውጦች 23,24,25፣ የተለወጠ የሞት እና የሜታሞርፎሲስ ጊዜ፣ የኢንዛይም ለውጦች፣ የመፈልፈያ ስኬት መቀነስ 24,25፣ ከፍተኛ እንቅስቃሴ 26፣ የኮሊንስቴሬዝ እንቅስቃሴ መከልከል 27 እና በመዋኛ አፈፃፀም ላይ የተደረጉ ለውጦች 7,28 ይገኙበታል። ሆኖም፣ በአምፊቢያን ውስጥ የሳይፐርሜትሪን ጂኖቶክሲካል ተፅእኖዎች ጥናቶች ውስን ናቸው። ስለዚህ፣ የአኑራን ዝርያዎች ለሳይፐርሜትሪን ያላቸውን ተጋላጭነት መገምገም አስፈላጊ ነው።
የአካባቢ ብክለት የአምፊቢያን መደበኛ እድገትና እድገት ላይ ተጽዕኖ ያሳድራል፣ ነገር ግን በጣም የከፋው አሉታዊ ውጤት በፀረ-ተባይ መጋለጥ ምክንያት የሚመጣ የዲኤንኤ የጄኔቲክ ጉዳት ነው።13. የደም ሴል ሞርፎሎጂ ትንተና ለዱር ዝርያዎች ብክለት እና እምቅ መርዛማነት አስፈላጊ ባዮአማካሪ ነው።29. የማይክሮኑክሊየስ ምርመራ በአካባቢ ውስጥ ያሉ ኬሚካሎችን ጂኖቶክሲክነት ለመወሰን በብዛት ከሚጠቀሙባቸው ዘዴዎች አንዱ ነው።30. እንደ አምፊቢያን ያሉ ህዋሳት የኬሚካል ብክለት ጥሩ አመላካች የሆነ ፈጣን፣ ውጤታማ እና ርካሽ ዘዴ ሲሆን ለጂኖቶክሲክ ብክለቶች መጋለጥን በተመለከተ መረጃ ሊሰጥ ይችላል31,32.
የዚህ ጥናት ዓላማ የንግድ ሳይፐርሜትሪን ቀመሮች ለትናንሽ የውሃ ውስጥ ታድፖሎች መርዛማ እምቅ አቅምን በማይክሮኑክሊየስ ምርመራ እና በሥነ-ምህዳር ስጋት ግምገማ መገምገም ነበር።
በምርመራው አጣዳፊ ወቅት ለተለያዩ የንግድ ሳይፐርሜትሪን ክምችት የተጋለጡ የፒ. ግራሲሊስ ታድፖሎች ድምር ሞት (%)።
ሥር የሰደደ ምርመራ በሚደረግበት ጊዜ ለተለያዩ የንግድ ሳይፐርሜትሪን ክምችቶች የተጋለጡ የፒ. ግራሲሊስ ታድፖሎች ድምር ሞት (%)።
የታየው ከፍተኛ ሞት የተከሰተው ለተለያዩ የሳይፐርሜትሪን ክምችት (6 እና 20 μg/L) በተጋለጡ አምፊቢያኖች ላይ በጄኖቶክሲካል ተጽእኖዎች ምክንያት ሲሆን ይህም በማይክሮኑክሊየስ (MN) እና በኤሪትሮሳይቶች ውስጥ ባሉ የኑክሌር እክሎች መኖራቸው ተረጋግጧል። የMN መፈጠር በሚቶሲስ ውስጥ ያሉ ስህተቶችን ያመለክታል እና ከማይክሮቱቡሎች ጋር ደካማ ትስስር፣ ለክሮሞሶም መወሰድ እና ማጓጓዝ ኃላፊነት ባላቸው የፕሮቲን ውስብስብ ነገሮች ላይ ያሉ ጉድለቶች፣ በክሮሞሶም መለያየት ላይ ያሉ ስህተቶች እና በዲኤንኤ ጉዳት ጥገና ላይ ያሉ ስህተቶች38,39 ጋር የተቆራኘ ሲሆን ከፀረ-ተባይ መንስኤ ከሚመጣው ኦክሲዴቲቭ ውጥረት40,41 ጋር ሊዛመድ ይችላል። ሌሎች ያልተለመዱ ነገሮች በሁሉም የተገመገሙ ክምችቶች ታይተዋል። የሳይፐርሜትሪን ክምችት መጨመር በኤሪትሮሳይቶች ውስጥ የኑክሌር እክሎችን በቅደም ተከተል በ5% እና 20% ጨምሯል። ለምሳሌ፣ የአንድ ዝርያ ዲኤንኤ ለውጦች ለአጭር እና ለረጅም ጊዜ ህልውና ከባድ መዘዝ ሊያስከትሉ ይችላሉ፣ ይህም የህዝብ ቁጥር መቀነስ፣ የመራቢያ ብቃት ለውጥ፣ የእርባታ መባዛት፣ የጄኔቲክ ልዩነት መጥፋት እና የተለወጠ የፍልሰት መጠን ያስከትላል። እነዚህ ሁሉ ምክንያቶች የዝርያዎችን ህልውና እና ጥገና ላይ ተጽዕኖ ሊያሳድሩ ይችላሉ42,43። የኤሪትሮይድ ያልተለመዱ ነገሮች መፈጠር በሳይቶኪንሲስ ውስጥ እገዳ መኖሩን ሊያመለክት ይችላል፣ ይህም ያልተለመደ የሴል ክፍፍል (ቢኑክሊየድ ኤሪትሮሳይቶች)44,45 ያስከትላል፤ ባለብዙ ሎብ ኒውክሊየስ የኑክሌር ሽፋን በርካታ ሎቦች ያሉት 46 ሲሆን ሌሎች የኤሪትሮይድ ያልተለመዱ ነገሮች ደግሞ እንደ ኒውክሊየድ ኩላሊት/ብሌብስ47 ካሉ የዲኤንኤ ማጉላት ጋር ሊዛመዱ ይችላሉ። የአኑክሊየድ ኤሪትሮሳይቶች መኖር በተለይም በተበከለ ውሃ ውስጥ የኦክስጅን ትራንስፖርት ችግርን ሊያመለክት ይችላል48,49። አፖፕቶሲስ የሴል ሞትን ያመለክታል50።
ሌሎች ጥናቶችም የሳይፐርሜትሪንን የጂኖቶክሲክ ተፅእኖዎች አሳይተዋል። ካባና እና ሌሎችም 51 በኦዶንቶፍሪነስ አሜሪካነስ ሴሎች ውስጥ ለ96 ሰዓታት ከፍተኛ የሳይፐርሜትሪን ክምችት (5000 እና 10,000 μg L−1) ከተጋለጡ በኋላ እንደ ባይኑክሊየሮች እና አፖፕቶቲክ ሴሎች ያሉ ማይክሮኑክሊየሮች እና የኑክሌር ለውጦች መኖራቸውን አሳይተዋል። በፒ. ቢሊጎኒገርስ52 እና ራይኔላ አሬናረም53 ውስጥ በሳይፐርሜትሪን ምክንያት የተፈጠረው አፖፕቶሲስ ተገኝቷል። እነዚህ ውጤቶች ሳይፐርሜትሪን በተለያዩ የውሃ ውስጥ ፍጥረታት ላይ የጂኖቶክሲክ ተፅእኖዎች እንዳሉት እና የኤምኤን እና የኢኤንኤ ምርመራ በአምፊቢያን ላይ የከፊል ገዳይ ተፅእኖዎች አመላካች ሊሆን እንደሚችል እና ለመርዛማ ንጥረ ነገሮች ለተጋለጡ ተወላጅ ዝርያዎች እና የዱር ህዝቦች ተፈጻሚ ሊሆን እንደሚችል ይጠቁማሉ12።
የሳይፐርሜትሪን የንግድ ቀመሮች ከፍተኛ የአካባቢ አደጋን ያስከትላሉ (አጣዳፊም ሆነ ሥር የሰደደ)፣ ዋና መሥሪያ ቤቶቹ ከአሜሪካ የአካባቢ ጥበቃ ኤጀንሲ (EPA) ደረጃ 54 ያልፋሉ፣ ይህም በአካባቢው ውስጥ ካሉ ዝርያዎችን አሉታዊ ተጽዕኖ ሊያሳድር ይችላል። በከባድ የአደጋ ግምገማ፣ ለሞት የሚዳርግ NOEC 3 μg L−1 ነበር፣ ይህም በውሃ ውስጥ የሚገኘው ክምችት ለዝርያዎቹ አደጋ ሊያስከትል እንደሚችል ያረጋግጣል55። ለኤንዶሰልፋን እና ለሳይፐርሜትሪን ድብልቅ የተጋለጡት የR. አሬናረም እጮች ገዳይ የሆነው NOEC ከ168 ሰዓታት በኋላ 500 μg L−1 ነበር፤ ይህ እሴት ከ336 ሰዓታት በኋላ ወደ 0.0005 μg L−1 ቀንሷል። ደራሲዎቹ እንደሚያሳዩት ተጋላጭነቱ ረዘም ላለ ጊዜ ለዝርያዎቹ ጎጂ የሆኑ ክምችቶች ዝቅተኛ ናቸው። የNOEC እሴቶች በተመሳሳይ ተጋላጭነት ጊዜ ከP. ግራሲሊስ ከፍ ያሉ መሆናቸውን ማጉላት አስፈላጊ ነው፣ ይህም ለሳይፐርሜትሪን የዝርያዎች ምላሽ ለዝርያዎች የተወሰነ መሆኑን ያሳያል። በተጨማሪም፣ በሞት አንፃር፣ ለሳይፐርሜትሪን ከተጋለጡ በኋላ የፒ. ግራሲሊስ የCHQ ዋጋ 64.67 ደርሷል፣ ይህም የአሜሪካ የአካባቢ ጥበቃ ኤጀንሲ54 ከተቀመጠው የማጣቀሻ እሴት ከፍ ያለ ነው፣ እና የR. አሬናረም እጮች የCHQ ዋጋ ከዚህ እሴት ከፍ ያለ ነበር (CHQ > 388.00 ከ336 ሰዓታት በኋላ)፣ ይህም የተጠኑት ፀረ-ተባዮች ለብዙ የአምፊቢያን ዝርያዎች ከፍተኛ አደጋ እንደሚፈጥሩ ያሳያል። ፒ. ግራሲሊስ ሜታሞርፎሲስን ለማጠናቀቅ በግምት 30 ቀናት እንደሚወስድ ከግምት ውስጥ በማስገባት፣ የተጠኑት የሳይፐርሜትሪን ክምችት በበሽታው የተያዙ ግለሰቦች ገና በለጋ እድሜያቸው ወደ አዋቂ ወይም የመራቢያ ደረጃ እንዳይገቡ በመከላከል የህዝብ ቁጥር መቀነስን ሊያመጣ እንደሚችል መደምደም ይቻላል።
በማይክሮኑክሊየስ እና በሌሎች የኤሪትሮሳይት ኒውክሊየር ያልተለመዱ ችግሮች ላይ በተሰላ የአደጋ ግምገማ፣ የCHQ እሴቶች ከ14.92 እስከ 97.00 የሚደርሱ ሲሆን ይህም ሳይፐርሜትሪን በተፈጥሮ መኖሪያው ውስጥም ቢሆን ለፒ. ግራሲሊስ የጄኖቶክሲክ አደጋ እንዳለው ያሳያል። የሞት መጠንን ከግምት ውስጥ በማስገባት፣ ለፒ. ግራሲሊስ የሚታገሱት ከፍተኛው የዜኖባዮቲክ ውህዶች ክምችት 4.24 μg L−1 ነበር። ሆኖም፣ እስከ 1 μg/L ዝቅተኛ የሆኑ ክምችቶች የጂኖቶክሲክ ተፅእኖዎችን አሳይተዋል። ይህ እውነታ ያልተለመዱ ግለሰቦችን ቁጥር ሊጨምር እና በመኖሪያ አካባቢያቸው ውስጥ የዝርያዎችን እድገት እና መባዛት ላይ ተጽዕኖ ሊያሳድር ይችላል፣ ይህም የአምፊቢያን ህዝብ ቁጥር እንዲቀንስ ያደርጋል።
የጸረ-ተባይ ሳይፐርሜትሪን የንግድ ቀመሮች ለፒ. ግራሲሊስ ከፍተኛ አጣዳፊ እና ሥር የሰደደ መርዛማነት አሳይተዋል። ምናልባትም በመርዛማ ውጤቶች ምክንያት ከፍተኛ የሞት መጠን ታይቷል፣ ይህም በማይክሮኑክሊ እና በኤሪትሮሳይት የኑክሌር እክሎች፣ በተለይም በተጣመሩ ኒውክሊየሮች፣ በሎቤድ ኒውክሊየሶች እና በቬሲኩላር ኒውክሊየሮች መኖር እንደተረጋገጠው። በተጨማሪም፣ የተጠኑት ዝርያዎች አጣዳፊም ሆነ ሥር የሰደደ የአካባቢ አደጋዎችን አሳይተዋል። እነዚህ መረጃዎች፣ በምርምር ቡድናችን ከቀደሙት ጥናቶች ጋር ተዳምረው፣ የተለያዩ የሳይፐርሜትሪን የንግድ ቀመሮች እንኳን አሁንም የአሲቲልኬሎሊንስቴሬዝ (AChE) እና የቡቲርልኮሊንስቴሬዝ (BChE) እንቅስቃሴዎችን እና ኦክሲዴቲቭ ውጥረትን መቀነስ እንዳስከተሉ አሳይተዋል58፣ እና በፒ. ግራሲሊስ ውስጥ በመዋኛ እንቅስቃሴ እና በአፍ የሚደረጉ ጉድለቶች59 ላይ ለውጦች አስከትለዋል፣ ይህም የሳይፐርሜትሪን የንግድ ቀመሮች ለዚህ ዝርያ ከፍተኛ ገዳይ እና ገዳይ መርዛማነት እንዳላቸው ያሳያል። ሃርትማን እና ሌሎች 60 የሳይፐርሜትሪን የንግድ ቀመሮች ከዘጠኝ ሌሎች ፀረ-ተባይ መድኃኒቶች ጋር ሲነፃፀሩ ለፒ. ግራሲሊስ እና ለሌላ ተመሳሳይ ዝርያ (P. cuvieri) በጣም መርዛማ እንደሆኑ ደርሰውበታል። ይህ የሚያመለክተው በሕጋዊ መንገድ የተፈቀደው የሳይፐርሜትሪን ክምችት ለአካባቢ ጥበቃ ከፍተኛ የሞት መጠን እና ለረጅም ጊዜ የህዝብ ቁጥር መቀነስ ሊያስከትል እንደሚችል ነው።
በአካባቢው ውስጥ የሚገኘው ክምችት ከፍተኛ ሞት ሊያስከትል እና ለፒ. ግራሲሊስ አደጋ ሊያስከትል ስለሚችል በአምፊቢያን ላይ ፀረ-ተባይ መርዝ ምን ያህል መርዛማ እንደሆነ ለመገምገም ተጨማሪ ጥናቶች ያስፈልጋሉ። በእነዚህ ፍጥረታት ላይ ያለው መረጃ በተለይም በብራዚል ዝርያዎች ላይ በጣም አነስተኛ ስለሆነ በአምፊቢያን ዝርያዎች ላይ ምርምር ማድረግ ሊበረታታ ይገባል።
ሥር የሰደደው የመርዛማነት ምርመራው በማይንቀሳቀስ ሁኔታ ውስጥ ለ168 ሰዓታት (7 ቀናት) የቆየ ሲሆን ከሞት በታች የሆኑ ክምችቶችም የሚከተሉት ነበሩ፡ 1፣ 3፣ 6 እና 20 μg ai L−1። በሁለቱም ሙከራዎች፣ በአንድ የሕክምና ቡድን ውስጥ 10 ታድፖሎች በስድስት ድግግሞሽ ተገምግመዋል፣ ይህም በአንድ ክምችት ውስጥ በአጠቃላይ 60 ታድፖሎች ነው። ይህ በእንዲህ እንዳለ፣ በውሃ ብቻ የሚደረግ ሕክምና እንደ አሉታዊ ቁጥጥር ሆኖ አገልግሏል። እያንዳንዱ የሙከራ ዝግጅት 500 ሚሊ ሊትር አቅም ያለው እና በ50 ሚሊ ሊትር መፍትሄ ውስጥ 1 ታድፖሎች ጥግግት ያለው ንፁህ የመስታወት ሳህን ነበር። ብልቃጡ ትነት እንዳይኖር ለመከላከል በፖሊኢታይሊን ፊልም ተሸፍኖ ያለማቋረጥ አየር እንዲገባ ተደርጓል።
ውሃው በኬሚካላዊ መንገድ የተተነተነው በ0፣ 96 እና 168 ሰዓታት ውስጥ የፀረ-ተባይ ክምችትን ለመወሰን ነው። እንደ ሳቢን እና ሌሎች 68 እና ማርቲንስ እና ሌሎች 69 ገለጻ፣ ትንታኔዎቹ የተከናወኑት በሳንታ ማሪያ የፌዴራል ዩኒቨርሲቲ የፀረ-ተባይ ትንተና ላቦራቶሪ (LARP) ውስጥ ከሶስት እጥፍ ኳድሩፖል የጅምላ ስፔክትሮሜትሪ ጋር የተጣመረ የጋዝ ክሮማቶግራፊን በመጠቀም ነው (ቫሪያን ሞዴል 1200፣ ፓሎ አልቶ፣ ካሊፎርኒያ፣ አሜሪካ)። በውሃ ውስጥ የፀረ-ተባይ መድኃኒቶችን መጠናዊ ውሳኔ እንደ ተጨማሪ ቁሳቁስ ይታያል (ሠንጠረዥ SM1)።
ለማይክሮኑክሊየስ ምርመራ (MNT) እና ለቀይ ሴል ኒውክሊየር ያልተለመደ ምርመራ (RNA)፣ ከእያንዳንዱ የሕክምና ቡድን የተውጣጡ 15 ታድፖሎች ተተነተኑ። ታድፖሎች በ5% ሊዶኬይን (50 ሚ.ግ. ግ-170) ሰመመን ተሰጥቷቸዋል፣ የደም ናሙናዎች ደግሞ በሚጣሉ ሄፓሪኒዝድ መርፌዎች በልብ ቀዳዳ ተሰብስበዋል። የደም ስሚር በጸዳ ማይክሮስኮፕ ስላይዶች ላይ ተዘጋጅቶ በአየር ደርቋል፣ በ100% ሜታኖል (4°ሴ) ለ2 ደቂቃዎች ተጠግኗል፣ ከዚያም በጨለማ ውስጥ ለ15 ደቂቃዎች በ10% የጂምሳ መፍትሄ ተቀባ። በሂደቱ መጨረሻ ላይ ስላይዶቹ ከመጠን በላይ እድፍን ለማስወገድ በተጣራ ውሃ ታጥበው በክፍል ሙቀት ደርቀዋል።
ከእያንዳንዱ ታድፖል ቢያንስ 1000 RBCs በ100× ማይክሮስኮፕ በመጠቀም የ MN እና ENA መኖርን ለመወሰን 71 ዓላማ ያለው 100× ማይክሮስኮፕ በመጠቀም ተተነተነ። በአጠቃላይ 75,796 RBCs ከታድፖል የተገኙ የሳይፐርሜትሪን ክምችት እና መቆጣጠሪያዎችን ከግምት ውስጥ በማስገባት ተገምግመዋል። የጄኖቶክሲዝምነት በካራስኮ እና ሌሎች እና Fenech እና ሌሎች 38,72 ዘዴ መሰረት የተተነተነው የሚከተሉትን የኑክሌር ቁስሎች ድግግሞሽ በመወሰን ነው፡ (1) የአኑክሌት ሴሎች፡ ኒውክሊየስ የሌላቸው ሴሎች፤ (2) አፖፕቶቲክ ሴሎች፡ የኑክሌር መበታተን፣ የፕሮግራም የተደረገ የሴል ሞት፤ (3) የቢኑክሌት ሴሎች፡ ሁለት ኒውክሊየስ ያላቸው ሴሎች፤ (4) የኑክሌር እምቡጦች ወይም የብሌብ ሴሎች፡ የኑክሌር ሽፋን ትናንሽ ወጣ ያሉ ኑክሊየሶች ያላቸው ሴሎች፣ ከማይክሮኑክሊየስ ጋር ተመሳሳይ መጠን ያላቸው ብልቦች፤ (5) የካርዮላይዝድ ሴሎች፡ የውስጥ ቁሳቁስ የሌላቸው የኒውክሊየስ ገጽታ ብቻ ያላቸው ሴሎች፤ (6) የተቆለፉ ሴሎች፡ በግልጽ የሚታዩ ስንጥቆች ወይም ቅርጻቸው ላይ ኖቶች ያላቸው ኒውክሊየሶች ያላቸው ሴሎች፣ የኩላሊት ቅርጽ ያላቸው ኒውክሊየሶችም ይባላሉ፤ (7) ሎቡሌት ሴሎች፡- ከላይ ከተጠቀሱት ቬሲክል የሚበልጡ የኑክሌር ፕሮቱሲኖች ያሏቸው ሴሎች፤ እና (8) ማይክሮ ሴሎች፡- የተጠናከረ ኒውክሊየስ እና የተቀነሰ ሳይቶፕላዝም ያላቸው ሴሎች። ለውጦቹ ከአሉታዊ የቁጥጥር ውጤቶች ጋር ተነጻጽረዋል።
የአጣዳፊ መርዛማነት ምርመራ ውጤቶች (LC50) የተተነተኑት በጂቤዚክ ሶፍትዌር እና በTSK-Trimmed Spearman-Karber ዘዴ 74 በመጠቀም ነው። ሥር የሰደደው የምርመራ መረጃ ለስህተት መደበኛነት (ሻፒሮ-ዊልክስ) እና ለልዩነት ተመሳሳይነት (ባርትሌት) ቅድመ-ሙከራ ተደርጎበታል። ውጤቶቹ የተተነተኑት የአንድ አቅጣጫ የልዩነት ትንተና (ANOVA) በመጠቀም ነው። የቱኪ ሙከራ እርስ በእርስ መረጃን ለማነፃፀር ጥቅም ላይ ውሏል፣ እና የዱኔት ሙከራ በሕክምና ቡድኑ እና በአሉታዊ የቁጥጥር ቡድን መካከል ያለውን መረጃ ለማነፃፀር ጥቅም ላይ ውሏል።
የLOEC እና የNOEC መረጃዎች የተተነተኑት የዱንኔትን ፈተና በመጠቀም ነው። የስታቲስቲክስ ሙከራዎች የተከናወኑት በስታቲስቲክስ 8.0 ሶፍትዌር (StatSoft) ሲሆን 95% ጠቀሜታ ያለው ደረጃ (p < 0.05) በመጠቀም ነው።