አንቲሄልሚንቲክ መድሃኒት N,N-diethyl-m-toluamide (DEET) AChE (acetylcholinesterase) ን እንደሚገታ ሪፖርት ተደርጓል እና ከመጠን በላይ የደም ቧንቧ መፈጠር ምክንያት የካርሲኖጂካዊ ባህሪዎች አሉት። በዚህ ጽሑፍ ውስጥ፣ DEET በተለይ angiogenesis ን የሚያበረታቱ endothelial ሴሎችን እንደሚያበረታታ እና የዕጢ እድገትን እንደሚያሳድግ እናሳያለን። DEET ማባዛትን፣ ፍልሰትን እና ማጣበቂያን ጨምሮ ወደ አንጂዮጄኔዝስ የሚያመሩ ሴሉላር ሂደቶችን ያንቀሳቅሳል። ይህ ከNO ምርት መጨመር እና በ endothelial ሕዋሳት ውስጥ የ VEGF አገላለጽ ጋር የተያያዘ ነው። የኤም 3ን ጸጥ ማድረግ ወይም ፋርማኮሎጂካል M3 አጋቾችን በመጠቀም እነዚህን ሁሉ ተፅእኖዎች አስቀርቷል ፣ ይህም በ DEET-induced angiogenesis M3-sensitive እንደሆነ ይጠቁማል። በኤንዶቴልያል እና በ HEK ሴሎች ውስጥ የካልሲየም ምልክትን የሚያካትቱ ሙከራዎች M3 ተቀባይዎችን ከመጠን በላይ የሚጨምሩ ፣ እንዲሁም አስገዳጅ እና የመትከያ ጥናቶች ፣ DEET እንደ M3 ተቀባዮች አሎስተር ሞዱላተር ይሠራል። በተጨማሪም DEET AChEን ይከላከላል፣በዚህም የአሴቲልኮሊን ባዮአቪላይዜሽን እና ከM3 ተቀባዮች ጋር ያለው ትስስር እንዲጨምር እና በአሎስቴሪክ ቁጥጥር አማካኝነት ፕሮአንጂዮጅኒክ ተፅእኖዎችን ያሳድጋል።
የመጀመሪያ ደረጃ ኢ.ሲ.ዎች ከስዊስ አይጦች ወሳጅ ቧንቧዎች ተለይተዋል። የማውጣት ዘዴው ከኮባያሺ ፕሮቶኮል 26 ተስተካክሏል. Murine ECs በ EBM-2 መካከለኛ ተጨምሯል ከ 5% ሙቀት-የማይነቃ FBS ጋር እስከ አራተኛው ማለፊያ ድረስ።
የ DEET ሁለት ውህዶች በHUVEC፣ U87MG፣ ወይም BF16F10 መስፋፋት ላይ የሚያሳድሩት ተጽዕኖ በCyQUANT Cell Proliferation Assay Kit (Molecular Probes፣ C7026) ተጠቅሟል። በአጭሩ፣ በአንድ ጉድጓድ 5.103 ህዋሶች በ96-ጉድጓድ ሳህን ውስጥ ተዘርተዋል፣ በአንድ ምሽት ላይ እንዲጣበቁ ተፈቅዶላቸዋል እና ከዚያም በ DEET ለ 24 ሰዓታት ይታከማሉ። የእድገት መሃከለኛውን ካስወገዱ በኋላ በእያንዳንዱ ማይክሮፕሌት ላይ የቀለም ማያያዣ መፍትሄን ይጨምሩ እና ሴሎቹን በ 37 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ ለ 30 ደቂቃዎች ይጨምሩ. የፍሎረሰንት ደረጃዎች የሚትራስ LB940 መልቲሞድ ማይክሮፕሌት አንባቢ (በርትሆልድ ቴክኖሎጂስ፣ ባድ ዋይልድባድ፣ ጀርመን) በ485 nm አነቃቂ ማጣሪያዎች እና 530 nm ልቀት ማጣሪያዎች በመጠቀም ተወስነዋል።
HUVEC በአንድ ጉድጓድ 104 ህዋሶች ጥግግት ላይ በ96-ጉድጓድ ሳህኖች ተዘርተዋል። ሴሎች ለ 24 ሰዓታት በ DEET ታክመዋል. የሕዋስ አዋጭነት የተገመገመው ባለቀለም ኤምቲቲ አሴይ (ሲግማ-አልድሪች፣ M5655) በመጠቀም ነው። የኦፕቲካል እፍጋት ዋጋዎች በ 570 nm የሞገድ ርዝመት ባለው ባለ ብዙ ሞድ ማይክሮፕሌት አንባቢ (ሚትራስ LB940) ላይ ተገኝተዋል።
የ DEET ተጽእኖዎች በብልቃጥ (in vitro angiogenesis assays) ተጠቅመዋል። በ 10-8 M ወይም 10-5 M DEET የሚደረግ ሕክምና በ HUVECs ውስጥ የካፒታል ርዝመት መፈጠርን ጨምሯል (ምስል 1 ሀ, ለ, ነጭ ባር). ከቁጥጥር ቡድን ጋር ሲነጻጸር, ከ 10-14 እስከ 10-5 M ባለው የ DEET ክምችት ላይ የሚደረግ ሕክምና የካፒታል ርዝመቱ በ 10-8 M DEET (ተጨማሪ ምስል S2) ላይ ወደ አንድ ቦታ ላይ መድረሱን ያሳያል. ከ10-8M እና 10-5M ባለው የማጎሪያ ክልል ውስጥ በ DEET በሚታከሙት HUVECs ውስጥ በቫይሮ ፕሮአንጊጀኒክ ተጽእኖ ውስጥ ምንም ልዩ ልዩነት አልተገኘም።
የ DEET በኒውቫስኩላርላይዜሽን ላይ ያለውን ተጽእኖ ለመወሰን, በ Vivo neovascularization ጥናቶች ውስጥ አድርገናል. ከ 14 ቀናት በኋላ በ 10-8 M ወይም 10-5 M DEET በተመረቱ የኢንዶቴልየም ሴሎች የተወጉ አይጦች የሂሞግሎቢን ይዘት ከፍተኛ ጭማሪ አሳይተዋል (ምስል 1 ሐ, ነጭ ባር).
በተጨማሪም DEET-induced neovascularization በ U87MG xenograft- bearing አይጦች ላይ ጥናት ተደርጎ ነበር በየቀኑ (ip) በ DEET በ DEET በሚወጉ ሰዎች ላይ የተለመደ የፕላዝማ ክምችት እንዲፈጠር በሚታወቅ መጠን 10-5M. በ 23. ሊገኙ የሚችሉ እጢዎች (ማለትም ዕጢዎች>100 ሚሜ 3) የ U87MG ሴሎች ወደ አይጥ ከተከተቡ ከ14 ቀናት በኋላ ታይተዋል። በ 28 ኛው ቀን ከቁጥጥር አይጦች (ምስል 1 ዲ, ካሬዎች) ጋር ሲነፃፀር በ DEET በሚታከሙ አይጦች ላይ የእጢ እድገት በከፍተኛ ሁኔታ ጨምሯል. በተጨማሪም የሲዲ 31 ዕጢዎች ማቅለም እንደሚያሳየው DEET በከፍተኛ ሁኔታ የካፊላሪ አካባቢን እንደሚጨምር ነገር ግን የማይክሮ ቬሰል ጥግግት አይደለም. (ምስል 1e-g).
በ DETA-induced proliferation ውስጥ የ muscarinic መቀበያዎችን ሚና ለመወሰን, 10-8 M ወይም 10-5 M DETA በ pFHHSiD (10-7 M, የተመረጠ M3 ተቀባይ ተቃዋሚ) ፊት ለፊት ጥቅም ላይ ይውላል. የ HUVEC ሕክምና. pFHHSiD በሁሉም ውህዶች (ሠንጠረዥ 1) ላይ የDETAን የመስፋፋት ባህሪያትን ሙሉ በሙሉ አግዷል።
በነዚህ ሁኔታዎች፣ DEET በHUVEC ህዋሶች ውስጥ የካፒታል ርዝመት ይጨምር እንደሆነ መርምረናል። በተመሳሳይ፣ pFHHSiD በDEET የሚፈጠረውን የካፒላሪ ርዝመት (ምስል 1 ሀ፣ ለ፣ ግራጫ ባር) በከፍተኛ ሁኔታ ከልክሏል። በተጨማሪም በM3 siRNA ተመሳሳይ ሙከራዎች ተካሂደዋል። ምንም እንኳን የመቆጣጠሪያው ሲአርኤን (siRNA) የፀጉር አሠራርን ለማራመድ ውጤታማ ባይሆንም, የ M3 muscarinic ተቀባይ ጸጥ ማድረግ የ DEET የፀጉር ርዝመትን የመጨመር ችሎታን አስቀርቷል (ምስል 1a, b, black bars).
በተጨማሪም ሁለቱም 10-8 M ወይም 10-5 M DEET-induced vascularization in vitro እና neovascularization in Vivo በ pFHHSiD (ምስል 1c, d, circles) ሙሉ በሙሉ ታግደዋል. እነዚህ ውጤቶች እንደሚያመለክቱት DEET ለተመረጡ M3 ተቀባይ ተቀባይ ተቃዋሚዎች ወይም ለኤም 3 ሲ አር ኤን ኤ ን አንጂዮጀንስን የሚያበረታታ ነው።
AChE የ DEET ሞለኪውላዊ ኢላማ ነው። እንደ ዲደንፔዚል ያሉ፣ እንደ AChE አጋቾች ሆነው የሚያገለግሉ፣ EC angiogenesis in vitro እና in mouse hindlimb ischemia model14 ሊያነቃቁ ይችላሉ። በHUVEC ውስጥ በ AChE ኢንዛይም እንቅስቃሴ ላይ የ DEET ሁለት ውህዶች ተጽእኖን ሞክረናል። ዝቅተኛ (10-8 M) እና ከፍተኛ (10-5 M) የ DEET ውህዶች ከቁጥጥር ሁኔታዎች ጋር ሲነፃፀር የ endothelial AChE እንቅስቃሴ ቀንሷል (ምስል 2)።
ሁለቱም የ DEET (10-8 M እና 10-5 M) አሴቲልኮላይንስተርሴዝ እንቅስቃሴን በHUVEC ላይ ቀንሰዋል። BW284c51 (10-5 M) ለ acetylcholinesterase inhibitors እንደ መቆጣጠሪያ ጥቅም ላይ ውሏል. ውጤቶቹ በ HUVEC ላይ ያለው የAChE እንቅስቃሴ መቶኛ በ DEET ሁለቱ ውህዶች በተሽከርካሪ ከሚታከሙ ህዋሶች ጋር ሲታከም ይገለጻል። እሴቶች በአማካይ ± SEM የስድስት ገለልተኛ ሙከራዎች ተገልጸዋል። * ገጽ <0.05 ከቁጥጥር ጋር ሲነጻጸር (ክሩካል-ዋሊስ እና ዱን ብዙ የንፅፅር ሙከራ)።
ናይትሪክ ኦክሳይድ (NO) በ angiogenic ሂደት ውስጥ ይሳተፋል 33 ስለዚህ በDEET-stimulated HUVECs ውስጥ ምንም ምርት አልተጠናም። በ DEET-የታከመ endothelial NO ምርት ከቁጥጥር ሴሎች ጋር ሲወዳደር ጨምሯል, ነገር ግን በ 10-8 ሜ (ምስል 3 ሐ) መጠን ብቻ ጠቃሚነት ላይ ደርሷል. በDEET-induced NO ምርትን የሚቆጣጠሩትን ሞለኪውላዊ ለውጦች ለመወሰን የኢኤንኦኤስ አገላለጽ እና ማግበር በምዕራባውያን መጥፋት ተተነተነ። ምንም እንኳን የ DEET ህክምና የ eNOS አገላለፅን ባይቀይርም ፣ በ eNOS phosphorylation (ምስል 3d) ውስጥ ካልታከሙ ህዋሶች ጋር ሲነፃፀር የመከለያ ቦታውን (Thr-495) እየቀነሰ በሚሠራበት ቦታ (Ser-1177) ላይ eNOS phosphorylation በከፍተኛ ሁኔታ ጨምሯል። በተጨማሪም የphosphorylated eNOS ሬሾ በአክቲቬሽን ቦታ እና በመከላከያ ቦታ ላይ የሚሰላው የፎስፈረስ ኢኤንኦስን መጠን ከጠቅላላው የኢንዛይም መጠን ጋር ካደረገ በኋላ ነው። ይህ ሬሾ ካልታከሙ ህዋሶች ጋር ሲነፃፀር በእያንዳንዱ የ DEET ክምችት በሚታከሙ HUVECs ላይ በከፍተኛ ሁኔታ ጨምሯል።
በመጨረሻም፣ ከዋና ዋናዎቹ ፕሮአንጂዮኒክ ምክንያቶች አንዱ የሆነው የVEGF አገላለጽ በምዕራባውያን መጥፋት ተተነተነ። DEET የVEGF አገላለጽ በከፍተኛ ሁኔታ ጨምሯል፣ ነገር ግን pFHHSiD ይህንን አገላለጽ ሙሉ በሙሉ ዘግቶታል።
የ DEET ተጽእኖዎች ለሁለቱም ፋርማኮሎጂካል እገዳዎች እና የM3 ተቀባይ መቀበያ ተቆጣጣሪዎች ስሜታዊ ናቸው, እኛ DEET የካልሲየም ምልክትን ሊያሳድግ ይችላል የሚለውን መላምት ሞክረናል። የሚገርመው ነገር፣ DEET በHUVEC (ውሂቡ ያልተገለጸ) እና HEK/M3 (ምስል 4a, b) ለሁለቱም ጥቅም ላይ የዋለው ሳይቶፕላስሚክ ካልሲየም መጨመር አልቻለም።
የልጥፍ ሰዓት፡- ዲሴ-30-2024