አንትሄልሚንቲክ መድሃኒት N,N-diethyl-m-toluamide (ዲኢት) AChE (አሲቲልኮሊንስቴሬዝ)ን እንደሚገታ እና ከመጠን በላይ የደም ሥር (vascularization) በመኖሩ ምክንያት የካንሰርነት ባህሪያት እንዳሉት ተዘግቧል። በዚህ ጽሑፍ ውስጥ፣ DEET በተለይ አንጂዮጄኔሲስን የሚያበረታቱ የኢንዶቴልያል ሴሎችን እንደሚያነቃቃ እና በዚህም የቲሞር እድገትን እንደሚጨምር እናሳያለን። DEET ወደ አንጂዮጄኔሲስ የሚያመሩ የሴሉላር ሂደቶችን ያነቃቃል፣ ይህም መባዛት፣ ፍልሰት እና ማጣበቅን ያካትታል። ይህ በኢንዶቴልያል ሴሎች ውስጥ የNO ምርት እና የVEGF አገላለጽ መጨመር ጋር የተያያዘ ነው። የM3 ጸጥታ ወይም የፋርማኮሎጂካል M3 አጋቾችን መጠቀም እነዚህን ሁሉ ውጤቶች አስወግዷል፣ ይህም DEET የፈጠረው አንጂዮጄኔሲስ M3 ስሜታዊ መሆኑን ይጠቁማል። በኤንዶቴልያል እና በHEK ሴሎች ውስጥ የካልሲየም ምልክት ማድረጊያን የሚያካትቱ ሙከራዎች እንዲሁም የM3 ተቀባዮችን ከመጠን በላይ የሚገልጹ እና የሚታሰሩ እና የሚተከሉ ጥናቶች እንደሚያሳዩት DEET የM3 ተቀባዮች አሎስተርክ ሞዱላር ሆኖ ያገለግላል። በተጨማሪም፣ DEET AChEን ይከለክላል፣ በዚህም የአሲቲልኮሊን እና ከM3 ተቀባዮች ጋር ያለውን ትስስር ባዮአቫሊቲ ይጨምራል፣ እና በአሎስተርክ ቁጥጥር አማካኝነት ፕሮአንጂዮጅኒክ ውጤቶችን ያሻሽላል።
ዋና ዋና የኢሲዎች (ECs) ከስዊዘርላንድ አይጦች አኦርታ ተነጥለዋል። የማውጣት ዘዴው ከኮባያሺ ፕሮቶኮል 26 የተወሰደ ነው። የኢሲዎች (Murine ECs) በ EBM-2 መካከለኛ ክፍል ውስጥ ተጨምረው እስከ አራተኛው መተላለፊያ ድረስ በ5% ሙቀት-አልባ FBS ተጨምረው ተክለዋል።
ሁለት የ DEET ክምችት በ HUVEC፣ U87MG ወይም BF16F10 መስፋፋት ላይ የሚያሳድረው ተጽእኖ የተተነተነው የCyQUANT Cell Proliferation Assay Kit (Molecular Probes፣ C7026) በመጠቀም ነው። ባጭሩ፣ በአንድ ጉድጓድ ውስጥ 5.103 ሴሎች በ96 ጉድጓድ ሳህን ውስጥ ተዘርተው በአንድ ሌሊት እንዲተሳሰሩ ተፈቅዶላቸዋል፣ ከዚያም ለ24 ሰዓታት በDEET ታክመዋል። የእድገት መካከለኛውን ካስወገዱ በኋላ፣ በእያንዳንዱ የማይክሮፕሌት ጉድጓድ ላይ የቀለም ማያያዣ መፍትሄ ይጨምሩ እና ሴሎቹን በ37°ሴ ለ30 ደቂቃዎች ያቀፉ። የፍሎረሰንስ መጠን የሚወሰነው በሚትራስ LB940 ባለብዙ ሁነታ ማይክሮፕሌት አንባቢ (በርቶልድ ቴክኖሎጂስ፣ ባድ ዋይልድባድ፣ ጀርመን) በመጠቀም ነው፣ ይህም 485 nm የማነቃቂያ ማጣሪያዎች እና 530 nm የልቀት ማጣሪያዎች ያሉት ነው።
HUVEC በ96 ጉድጓድ ሳህኖች ውስጥ በአንድ ጉድጓድ ውስጥ በ104 ሴሎች ጥግግት ተዘርቷል። ሴሎች ለ24 ሰዓታት በDEET ታክመዋል። የሕዋስ ህያውነት በቀለምሜትሪክ MTT ምርመራ (ሲግማ-አልድሪች፣ M5655) ተገምግሟል። የኦፕቲካል ጥግግት እሴቶች በ570 nm የሞገድ ርዝመት ባለብዙ ሁነታ ማይክሮፕሌት አንባቢ (ሚትራስ LB940) ላይ ተገኝተዋል።
የDEET ውጤቶች በብልቃጥ ውስጥ የአንጎጄኔሲስ ምርመራዎችን በመጠቀም ጥናት ተደርጎባቸዋል። በ10-8 M ወይም 10-5 M DEET የሚደረግ ሕክምና በHUVECs ውስጥ የካፒላሪ ርዝመት መፈጠርን ጨምሯል (ምስል 1a፣ b፣ ነጭ አሞሌዎች)። ከቁጥጥር ቡድኑ ጋር ሲነጻጸር፣ ከ10-14 እስከ 10-5 M ባለው የDEET ክምችት የሚደረግ ሕክምና የካፒላሪ ርዝመቱ በ10-8 M DEET ላይ ወደ አንድ ደረጃ መድረሱን አሳይቷል (ተጨማሪ ምስል S2)። በ10-8 M እና 10-5 M ክምችት ክልል ውስጥ በDEET የታከሙ HUVECዎች በብልቃጥ ውስጥ ፕሮአንጂዮጂኒክ ውጤት ላይ ምንም ጉልህ ልዩነት አልተገኘም።
የDEET በኒዎቫስኩላርላይዜሽን ላይ የሚያሳድረውን ተጽእኖ ለማወቅ፣ በቪቮ ኒዎቫስኩላርላይዜሽን ጥናቶችን አካሂደናል። ከ14 ቀናት በኋላ፣ ከ10-8 M ወይም 10-5 M DEET ያላቸው ቅድመ-ልማት ያላቸው የኢንዶቴልያል ሴሎች የተወጉ አይጦች በሂሞግሎቢን ይዘት ላይ ከፍተኛ ጭማሪ አሳይተዋል (ምስል 1ሐ፣ ነጭ አሞሌዎች)።
በተጨማሪም፣ በ DEET ምክንያት የሚመጣው ኒዎቫስኩላርላይዜሽን በ U87MG xenograft-baring አይጦች ላይ ጥናት ተደርጎበታል፤ እነዚህም በየቀኑ (ip) በ DEET የሚወጉ ሲሆን ይህም በተጋለጡ ሰዎች ላይ የተለመደ ነው። በ23. ሊታወቁ የሚችሉ ዕጢዎች (ማለትም ከ100 ሚሜ 3 በላይ የሆኑ ዕጢዎች) ወደ አይጦች ከተወጉ ከ14 ቀናት በኋላ ታይተዋል። በ28ኛው ቀን፣ በ DEET በሚታከሙ አይጦች ላይ ከቁጥጥር አይጦች ጋር ሲነጻጸር የቲዩመር እድገት በከፍተኛ ሁኔታ ተሻሽሏል (ምስል 1d፣ ካሬዎች)። በተጨማሪም፣ የቲዩመርስ CD31 ቀለም DEET የካፕላሪ አካባቢን በእጅጉ እንደጨመረ ያሳያል ነገር ግን የማይክሮቬሰል ጥግግት አይደለም። (ምስል 1e–g)።
የሙስካሪኒክ ተቀባዮች በDETA ምክንያት በሚመጣው እድገት ውስጥ ያላቸውን ሚና ለማወቅ፣ pFHHSiD (10-7 M፣ የተመረጠ M3 ተቀባይ ተቃዋሚ) ባለበት ጊዜ ከ10-8 M ወይም 10-5 M DETA ጥቅም ላይ ውሏል። የHUVEC. pFHHSiD ሕክምና በሁሉም ክምችት ላይ የDETA የመራቢያ ባህሪያትን ሙሉ በሙሉ አግዷል (ሠንጠረዥ 1)።
በእነዚህ ሁኔታዎች፣ DEET በHUVEC ሴሎች ውስጥ የካፒላሪ ርዝመትን ይጨምራል ወይ የሚለውን መርምረናል። በተመሳሳይ፣ pFHHSiD በDEET ምክንያት የሚመጣውን የካፒላሪ ርዝመት በእጅጉ ከልክሏል (ምስል 1a፣ b፣ ግራጫ አሞሌዎች)። በተጨማሪም፣ ተመሳሳይ ሙከራዎች በM3 siRNA ተካሂደዋል። የቁጥጥር siRNA የካፒላሪ መፈጠርን በማበረታታት ረገድ ውጤታማ ባይሆንም፣ የM3 muscarinic receptor ዝምታ የDEET የካፒላሪ ርዝመትን የመጨመር ችሎታን አስወግዷል (ምስል 1a፣ b፣ ጥቁር አሞሌዎች)።
በተጨማሪም፣ በብልቃጥ ውስጥ ከ10-8 M ወይም 10-5 M DEET የተፈጠረ የደም ሥር (vascularization) እና በ vivo ውስጥ ኒዮቫስኩላራይዜሽን በpFHHSiD ሙሉ በሙሉ ታግደዋል (ምስል 1c፣ d፣ ክበቦች)። እነዚህ ውጤቶች እንደሚያሳዩት DEET ለተመረጡ የM3 ተቀባይ ተቃዋሚዎች ወይም ለM3 siRNA ስሜታዊ በሆነ መንገድ አማካኝነት አንጂዮጄኔሲስን ያበረታታል።
AChE የDEET ሞለኪውላዊ ኢላማ ነው። እንደ AChE አጋቾች ሆነው የሚያገለግሉት ዶኔፔዚል ያሉ መድኃኒቶች በብልቃጥ ውስጥ የ EC አንጎጄኔሲስን እና የመዳፊት የኋላ እጅና እግር ኢሽሚያ ሞዴሎችን ሊያነቃቁ ይችላሉ14። በHUVEC ውስጥ ሁለት የ DEET ክምችት በ AChE ኢንዛይም እንቅስቃሴ ላይ ያለውን ተጽእኖ ሞክረናል። ዝቅተኛ (10-8 M) እና ከፍተኛ (10-5 M) የ DEET ክምችት ከቁጥጥር ሁኔታዎች ጋር ሲነጻጸር የኢንዶቴልያል AChE እንቅስቃሴን ቀንሷል (ምስል 2)።
ሁለቱም የDEET ክምችት (10-8 M እና 10-5 M) በHUVEC ላይ የአሲቲልኬሎላይንስቴሬዝ እንቅስቃሴን ቀንሰዋል። BW284c51 (10-5 M) ለአሲቲልኬሎላይንስቴሬዝ አጋቾች እንደ መቆጣጠሪያ ጥቅም ላይ ውሏል። ውጤቶቹ በተሽከርካሪ የታከሙ ሴሎች ጋር ሲነጻጸር በHUVEC ላይ በሁለት የDEET ክምችት የታከሙ የAChE እንቅስቃሴ መቶኛ ሆነው ይገለፃሉ። እሴቶቹ እንደ ስድስት ገለልተኛ ሙከራዎች አማካይ ± SEM ይገለፃሉ። *p < 0.05 ከቁጥጥር ጋር ሲነጻጸር (ክሩስካል-ዋሊስ እና ዱን ባለብዙ ንፅፅር ሙከራ)።
ናይትሪክ ኦክሳይድ (NO) በአንጂዮጂኒክ ሂደት 33 ውስጥ ይሳተፋል፣ ስለዚህ፣ በDEET-በተነቃቁ HUVECዎች ውስጥ የNO ምርት ጥናት ተደርጎበታል። በDEET-የተያዙ የኢንዶቴሊየም NO ምርት ከቁጥጥር ሴሎች ጋር ሲነጻጸር ጨምሯል፣ ነገር ግን ጠቀሜታው የተገኘው በ10-8 M መጠን ብቻ ነው (ምስል 3ሐ)። በDEET-የተነሳውን የNO ምርት የሚቆጣጠሩ ሞለኪውላዊ ለውጦችን ለማወቅ፣ eNOS አገላለጽ እና ማግበር በዌስተርን ብሎቲንግ ተተነተኑ። የDEET ሕክምና የeNOS አገላለጽን ባያዛባም፣ በeNOS ፎስፈረስሌሽን ውስጥ ካሉት ያልተያዙ ሴሎች ጋር ሲነጻጸር የመከልከያ ቦታውን (Thr-495) ሲቀንስ በማነቃቂያ ቦታው (Ser-1177) ላይ የኢNOS ፎስፈረስሌሽንን በከፍተኛ ሁኔታ ጨምሯል (ምስል 3መ)። በተጨማሪም፣ በማነቃቂያ ቦታው እና በመከልከያ ቦታው ላይ ያለው የፎስፈረስሌሽን eNOS መጠን ከጠቅላላው የኢንዛይም መጠን ጋር መደበኛ ካደረገ በኋላ ይሰላል። ይህ ጥምርታ ከማይታከሙ ሴሎች ጋር ሲነጻጸር በእያንዳንዱ የDEET ክምችት በሚታከሙ HUVECዎች ላይ በከፍተኛ ሁኔታ ጨምሯል (ምስል 3መ)።
በመጨረሻም፣ ከዋና ዋና ፕሮአንጂዮጂኒክ ምክንያቶች አንዱ የሆነው የVEGF አገላለጽ በዌስተርን ብሎቲንግ ተተነተነ። DEET የVEGF አገላለጽን በከፍተኛ ሁኔታ ጨምሯል፣ pFHHSiD ደግሞ ይህንን አገላለጽ ሙሉ በሙሉ አግዶታል።
የDEET ተጽእኖዎች ለፋርማኮሎጂካል እገዳ እና ለM3 ተቀባዮች ቅነሳ ስሜታዊ ስለሆኑ፣ DEET የካልሲየም ምልክትን ሊያሻሽል ይችላል የሚለውን መላምት ሞክረናል። በሚገርም ሁኔታ፣ DEET በHUVEC (መረጃው አልታየም) እና HEK/M3 (ምስል 4a፣ ለ) ውስጥ ጥቅም ላይ የዋሉትን ሁለቱንም ክምችቶች ሳይቶፕላዝሚክ ካልሲየም መጨመር አልቻለም።
የፖስታ ሰዓት፡- ታህሳስ-30-2024