የጂኖም-ሰፊ ማህበር ትንተና በኤምኤኤምፒ የተገኘ የመከላከያ ምላሽ ጥንካሬ እና በማሽላ ውስጥ የቅጠል ቦታን የመቋቋም ጥንካሬ

ተክሎች እና በሽታ አምጪ ቁሳቁሶች

የማሽላ ማኅበር ካርታ ሥራ ሕዝብ ማሽላ ልወጣ ሕዝብ (ኤስሲፒ) በመባል የሚታወቀው በዶክተር ፓት ብራውን በኢሊኖይ ዩኒቨርሲቲ (አሁን በዩሲ ዴቪስ) ቀርቧል።ቀደም ሲል የተገለፀው እና በዩኤስ አከባቢዎች ውስጥ የእጽዋትን እድገት እና እድገትን ለማመቻቸት ወደ ፎቶፔሪዮድ-ኢንሴሲቲቭ እና ትንሽ ቁመት የተቀየሩ የተለያዩ መስመሮች ስብስብ ነው።በዚህ ጥናት ውስጥ ከዚህ ህዝብ ውስጥ 510 መስመሮች ጥቅም ላይ ውለዋል ምንም እንኳን በመጥፎ ማብቀል እና በሌሎች የጥራት ቁጥጥር ጉዳዮች ምክንያት ሁሉም መስመሮች በሶስቱም ባህሪያት ትንታኔ ውስጥ ጥቅም ላይ አልዋሉም.በመጨረሻም ከ345 መስመሮች የተገኘው መረጃ ለቺቲን ምላሽ፣ 472 መስመሮች ለflg22 ምላሽ፣ እና 456 ለTLS መቋቋም ጥቅም ላይ ውለዋል።ለ. ኩኪstrain LSLP18 የተገኘው ከአርካንሳስ ዩኒቨርሲቲ ከዶክተር ቡርት ብሉህም ነው።

የ MAMP ምላሽ መለኪያ

በዚህ ጥናት flg22 (Genscript catalog# RP19986) እና ቺቲን ሁለት የተለያዩ MAMPs ጥቅም ላይ ውለዋል።የማሽላ ተክሎች በአፈር በተሞሉ ጠፍጣፋዎች ላይ (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) በግሪን ሃውስ ውስጥ ተዘርግተው ነበር.ተክሎች በሚሰበሰቡበት ቀን ተጨማሪ የቅጠል እርጥበትን ለማስወገድ ናሙና ከመሰብሰቡ አንድ ቀን በፊት ውሃ ይጠጣሉ.

መስመሮቹ በዘፈቀደ እና በሎጂስቲክስ ምክንያቶች በ 60 መስመሮች ውስጥ በቡድን ተክለዋል.ለእያንዳንዱ መስመር ሶስት 'ማሰሮዎች' በአንድ መስመር ሁለት ዘሮች ተክለዋል.መላው ህዝብ እስኪገመገም ድረስ የተከታዮቹ ክፍሎች የተተከሉት የቀደመውን ስብስብ እንደተጠናቀቀ ነው።ለሁለቱም MAMPs ሁለት የሙከራ ሩጫዎች ተካሂደዋል በሁለቱ ሩጫዎች እንደገና በዘፈቀደ የተደረጉ ጂኖታይፕስ።

ቀደም ሲል እንደተገለፀው የ ROS ምርመራዎች ተካሂደዋል.በአጭሩ ለእያንዳንዱ መስመር ስድስት ዘሮች በ 3 የተለያዩ ማሰሮዎች ተክለዋል.ከተፈጠሩት ችግኞች መካከል ሦስቱ ተመሳሳይነት ባለው መልኩ ተመርጠዋል.ያልተለመዱ የሚመስሉ ወይም በጣም ረጅም ወይም ከብዙዎቹ ያነሱ ችግኞች ጥቅም ላይ አልዋሉም።3 ሚሊ ሜትር የሆነ ዲያሜትር ያላቸው አራት የቅጠል ዲስኮች ከ 4 ኛው ቅጠል ሰፊው ክፍል ሶስት የተለያዩ የ15 ቀን እድሜ ያላቸው የማሽላ እፅዋት ተቆርጠዋል።ከሁለት ተክሎች አንድ ዲስክ በአንድ ቅጠል እና ሁለት ዲስኮች ከአንድ ተክል, ሁለተኛው ዲስክ የውሃ መቆጣጠሪያ ይሆናል (ከዚህ በታች ይመልከቱ).ዲስኮች በግለሰብ ደረጃ በ50 μl H20 በጥቁር 96 ጉድጓድ ሳህን ውስጥ ተንሳፈፉ፣ ለብርሃን መጋለጥን ለመከላከል በአሉሚኒየም ማህተም የታሸጉ እና በአንድ ሌሊት በክፍል ሙቀት ውስጥ እንዲቆዩ ተደርገዋል።በማግስቱ ጠዋት 2 mg/ml chemiluminescent probe L-012 (ዋኮ፣ ካታሎግ # 120-04891)፣ 2 mg/ml horseradish peroxidase (አይነት VI-A፣ ሲግማ-አልድሪች፣ ካታሎግ # P6782) እና በመጠቀም ምላሽ ተፈጠረ። 100 mg/ml Chitin ወይም 2 μM Flg22.የዚህ ምላሽ መፍትሄ 50 µl ከአራቱ ጉድጓዶች ውስጥ በሦስቱ ላይ ተጨምሯል።አራተኛው ጉድጓድ የማሾፍ መቆጣጠሪያ ነበር, እሱም MAMP ን ሳይጨምር የምላሽ መፍትሄ ተጨምሯል.በእያንዳንዱ ሳህን ውስጥ ውሃ ብቻ የያዙ አራት ባዶ ጉድጓዶችም ተካትተዋል።

የምላሹን መፍትሄ ከጨመረ በኋላ፣ luminescence የሚለካው SynergyTM 2 multi-detection microplate reader (BioTek) በየ 2 ደቂቃው ለ1 ሰአታት ነው።የሰሌዳ አንባቢ በዚህ 1 ሰአት ውስጥ በየ 2 ደቂቃው የluminescence መለኪያዎችን ይወስዳል።ለእያንዳንዱ ጉድጓድ ዋጋ ለመስጠት የሁሉም 31 ንባቦች ድምር ይሰላል።ለእያንዳንዱ የጂኖአይፕ ምላሽ የMAMP ምላሽ የሚገመተው ዋጋ እንደ (የሶስቱ የሙከራ ጉድጓዶች አማካኝ የluminescence ዋጋ—የሞክ ጉድጓድ ዋጋ) -ከአማካኝ ባዶ የጉድጓድ ዋጋ ሲቀነስ።ባዶ የጉድጓድ እሴቶቹ በቋሚነት ወደ ዜሮ ቅርብ ነበሩ።

ቅጠል ዲስኮች የኒኮቲያና ቤንታሚያና, አንድ ከፍተኛ ምላሽ ሰጭ የማሽላ መስመር (SC0003) እና አንድ ዝቅተኛ ምላሽ ሰጪ የማሽላ መስመር (PI 6069) በእያንዳንዱ 96-ጉድጓድ ሳህን ውስጥ ለጥራት ቁጥጥር ዓላማዎች እንደ መቆጣጠሪያ ተካትተዋል።

ለ. ኩኪየክትባት ዝግጅት እና መከተብ

ለ. ኩኪቀደም ሲል እንደተገለፀው inoculum ተዘጋጅቷል.በአጭሩ የማሽላ እህሎች ለሶስት ቀናት በውሃ ውስጥ ይታጠባሉ, ታጥበው, በ 1 ሊ ሾጣጣ ጠርሙሶች ውስጥ ተጭነዋል እና ለአንድ ሰአት በ 15psi እና 121 ° ሴ.ከዚያም እህሎቹ ከ 5 ሚሊር ገደማ ትኩስ ባሕል ማከሬድ ማይሴሊያ ጋር ተከተቡለ. ኩኪLSLP18 ለይተው ለ 2 ሳምንታት በቤት ሙቀት ውስጥ ይተዋሉ, በየ 3 ቀኑ ጠርሙሶችን ያናውጡ.ከ 2 ሳምንታት በኋላ በፈንገስ የተጠቃው የማሽላ እህል በአየር ደረቀ እና ከዚያም በ 4 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ እስከ የእርሻ መከተብ ድረስ ተከማችቷል.ለሙከራው ተመሳሳይ ኢንኩሉም ጥቅም ላይ ውሎ ነበር እና በየአመቱ ትኩስ ይሆናል።ለክትባት, ከ6-10 የተጠቁ እህሎች ከ4-5 ሳምንታት እድሜ ያላቸው የማሽላ እፅዋት ውስጥ ተጭነዋል.ከእነዚህ ፈንገሶች የተፈጠሩት ስፖሮች በአንድ ሳምንት ጊዜ ውስጥ በወጣት የማሽላ ተክሎች ላይ ኢንፌክሽን ጀመሩ።

የዘር ዝግጅት

በሜዳው ላይ የማሽላ ዘር ከመትከሉ በፊት ~ 1% Spirato 480 FS Fungicide፣ 4% Sebring 480 FS Fungicide፣ 3% Sorpro 940 ES ዘርን በያዘው በፀረ-ነፍሳት፣ በፀረ-ነፍሳት እና ደህንነቱ በተጠበቀ ድብልቅ ታክሟል።ከዚያም ዘሮቹ ለ 3 ቀናት በአየር ውስጥ እንዲደርቁ ይደረጋሉ, ይህም በዘሮቹ ዙሪያ ያለውን የዚህ ድብልቅ ቀጭን ሽፋን ያቀርባል.ደህንነቱ የተጠበቀው ፀረ-አረም መድሐኒት Dual Magnum እንደ ቅድመ-መውጣት ህክምና መጠቀምን ፈቅዷል።

የዒላማ ቅጠል ስፖት መቋቋም ግምገማ

SCP በClayton, ኤንሲ በጁን 14-15 2017 እና ሰኔ 20, 2018 በዘፈቀደ የተሟላ የማገጃ ንድፍ በማዕከላዊ የሰብል ምርምር ጣቢያ በእያንዳንዱ ጉዳይ ላይ ሁለት የሙከራ ድግግሞሽ ተክሏል.ሙከራዎች በ 1.8 ሜትር ነጠላ ረድፎች ውስጥ በ 0.9 ሜትር የረድፍ ስፋት በ 10 ዘሮች በአንድ ቦታ ላይ ተክለዋል.የጠርዙን ተፅእኖ ለመከላከል በእያንዳንዱ ሙከራ ዙሪያ ሁለት የድንበር ረድፎች ተክለዋል.ሙከራዎቹ በጁላይ 20, 2017 እና ጁላይ 20, 2018 የተከተቡ ሲሆን በዚህ ጊዜ የማሽላ ተክሎች በእድገት ደረጃ ላይ ይገኛሉ 3. ደረጃዎች ከአንድ እስከ ዘጠኝ ሚዛኖች ተወስደዋል, ተክሎች ምንም ዓይነት የበሽታ ምልክት በማይታይበት ጊዜ ዘጠኝ እና ሙሉ በሙሉ ተመዝግበዋል. የሞቱ ተክሎች እንደ አንድ ተቆጥረዋል.በየአመቱ ከተከተቡ ከሁለት ሳምንታት በኋላ በ 2017 ሁለት ደረጃዎች እና በ 2018 ውስጥ አራት ንባቦች ተወስደዋል.sAUDPC (በበሽታ እድገት ከርቭ ስር ያለው ደረጃውን የጠበቀ ቦታ) ቀደም ሲል እንደተገለፀው ይሰላል።